[发明专利]一组能抑制迟钝爱德华氏耐药菌膜形成的核酸适配体及其应用

说明书

一组能抑制迟钝爱德华氏耐药菌膜形成的核酸适配体及其应用，涉及核酸适配体。提供一组能抑制迟钝爱德华氏耐药菌膜形成的核酸适配体，所述核酸适配体以迟钝爱德华氏耐药菌膜为靶标，以抑制菌膜形成率为筛选指标，选取SELEX技术筛选所得，包括三种抑制迟钝爱德华氏耐药菌膜形成的核酸适配体YM1、YM2、YM3。本发明还提供所述核酸适配体在制备菌膜抑制剂中的应用。具有筛选周期短、效率高、合成简单、不易产生耐药性、抑制效果好等优点，具有较好的应用前景，为进一步开发具有功能性的核酸适配体提供理论基础。

技术领域

本发明涉及核酸适配体，尤其是涉及一组能抑制迟钝爱德华氏耐药菌膜形成的核酸适配体及其应用。

背景技术

迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)又称迟缓爱德华氏菌或缓慢爱德华氏菌，它可以感染鳗鲡、虹鳟、黑鲈、大菱鲆、大马哈鱼、斑点叉尾鮰等多种鱼类，是目前水产养殖业中危害较大的病原菌之一。此外，迟钝爱德华氏菌也能导致人类患有腹泻、肠胃炎和败血症等感染性疾病，因此也是重要的人畜共患病病原菌。目前，主要使用抗生素来防治该菌，但由于细菌菌膜的形成，使抗生素无法有效的发挥作用或效果大打折扣，这不仅加剧细菌耐药性的问题，还给人类健康带来严重的威胁。

核酸适配体(Aptamer)又称适配体或适体，是通过指数富集配体的系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)筛选出的对靶目标具有较高亲和特异性的寡核苷酸分子。核酸适配体可以和多种靶目标相结合，如细胞、细菌、病毒、寄生虫、蛋白质、抗生素、金属离子等，更具有分子量小、结构简单、稳定性高等诸多优点，已广泛应用于生物检测、药物治疗和疾病诊断等各个研究领域。目前核酸适配体在抑制功能方面也有相关报道，如对细菌和病毒等靶标的抑制作用，研究表明适配体与靶标的结合位点通常是具有功能的活性位点，当该位点被适配体结合后，靶标的生物活性受到抑制，其相应的功能就会被阻碍。开发核酸适配体成为抑制药物从而替代抗生素，具有较好应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一组能较好抑制迟钝爱德华氏耐药菌膜形成的核酸适配体YM1、YM2、YM3。

本发明的另一目的在于提供所述核酸适配体在制备菌膜抑制剂中的应用。

本发明提供一组能较好抑制迟钝爱德华氏耐药菌膜形成的核酸适配体，所述核酸适配体以迟钝爱德华氏耐药菌膜为靶标，以抑制菌膜形成率为筛选指标，选取SELEX技术筛选所得，包括三种抑制迟钝爱德华氏耐药菌膜形成的核酸适配体YM1、YM2、YM3，其核酸序列如表1所示。

表1三种核酸适配体的序列

本发明还提供所述核酸适配体在制备菌膜抑制剂中的应用。

所述应用的具体方法可为：核酸适配体的SELEX筛选、高频序列的分析、对菌膜形成的抑制率测定、对菌膜的特异性识别以及二级结构的模拟，可作为抑菌剂、杀菌剂使用，或添加到现有的抑菌剂或杀菌剂中辅助杀菌或抑菌。

本发明具有如下优点：

本发明对核酸适配体YM1、YM2、YM3抗菌膜功能进行分析，具有筛选周期短、效率高、合成简单、不易产生耐药性、抑制效果好等优点，具有较好的应用前景，为进一步开发具有功能性的核酸适配体提供理论基础。

附图说明

图1为核酸适配体的SELEX筛选的流程示意图。

图2为筛选过程中适配体富集库的抑制率变化。

图3为核酸适配体对不同菌膜的抑制作用。图中，Et.N：迟钝爱德华氏耐药菌；Et.M：迟钝爱德华氏敏感菌；Va：溶藻弧菌；Vh：哈维氏弧菌；Ec：大肠杆菌；Pa：铜绿假单胞菌。

图4为核酸适配体对迟钝爱德华氏敏感菌和耐药菌的抑制作用。