[发明专利]一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗

说明书

本发明涉及一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，疫苗是灭活的表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4‑F。表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4‑F的构建方法，在表达EGFP的重组血清4禽腺病毒的F1和F2基因之间插入血清8b型禽腺病毒纤突基因。一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，灭活是将细胞培养的FA4‑F的重组病毒液加入0.1％v/v的甲醛37℃作用24h进行灭活；甲醛灭活病毒液与油佐剂按1:3(v/v)的比例乳化用于制备油佐剂灭活疫苗。通过本发明，针对目前国内鸡群中正流行爆发的由FAdV‑4和FAdV‑8感染引起的HHS和IBH，为防控FAdV‑4和FAdV‑8b的感染提供了候选疫苗株；因此，本发明具有一定的市场应用价值。

技术领域

本发明涉及一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，属于疫苗生产技术领域。

背景技术

禽腺病毒(Fowl Adenovirus,FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属。根据基因组与血清交叉中和反应性，目前禽腺病毒可分为5个种(FAdV-A～E)，12个血清型(FAdV-1～8a和FAdV-8b～11)。流行病学研究表明禽腺病毒在世界范围内广泛分布，且对不同日龄的家禽均易感。禽腺病毒感染一般引起亚临床症状，而急性感染可引起以包涵体肝炎(IBH)、肝炎-心包积液综合征(HHS)以及腺病毒肌胃糜烂(AGE)等为主的临床症状。

疫苗接种是预防控制该类疾病的主要手段。近年来，国内外有研究报道，灭活疫苗、亚单位疫苗、减毒活疫苗及基因工程疫苗等可用于HHS和IBH的免疫预防。其中大部分是针对FAdV-4单价灭活苗、FAdV-8单价灭活苗以及与其它禽源病毒抗原制成的多联灭活苗。目前，同时针对FAdV-4和FAdV-8的二价基因工程灭活疫苗的研究却未见报道。

发明人利用本课题组前期构建的表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4-F(叶建强等.表达血清8型禽腺病毒纤突蛋白重组血清4型禽腺病毒以及制备方法.专利申请号：202110332476.5，公布号：CN 113061586A)，经灭活后制备成灭活疫苗，并对其免疫保护性做了研究，结果显示该疫苗可用于同时免疫防控FAdV-4和FAdV-8b。

发明内容

本发明的目的在于针对上述现有技术的不足，提供一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗。

本发明的目的是这样实现的，一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，其特征在于，疫苗是灭活的表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4-F。

表达血清8b型禽腺病毒纤突蛋白的重组血清4型禽腺病毒FA4-F的构建方法，在表达EGFP的重组血清4禽腺病毒的F1和F2基因之间插入血清8b型禽腺病毒纤突基因。

一种重组禽腺病毒二价灭活疫苗，灭活是将细胞培养的FA4-F的重组病毒液加入0.1％v/v的甲醛37℃作用24h进行灭活；甲醛灭活病毒液与油佐剂按1:3(v/v)的比例乳化用于制备油佐剂灭活疫苗。

细胞为鸡肝癌细胞(Chicken Leghorn Male Hepatocellular Cell,LMH)。

灭活疫苗中，病毒终浓度为5.0×10 ⁶TCID₅₀/ml。

灭活疫苗在制备防治由血清4型禽腺病毒FAdV-4和血清8b型禽腺病毒FAdV-8b感染引起的禽肝炎-心包积液综合征HHS和包涵体肝炎IBH的应用。