[发明专利]一种用于蜘蛛丝腺组织染色质交联的缓冲试剂和方法

权利要求书

1.一种用于蜘蛛丝腺组织染色质交联的缓冲试剂，其特征在于，所述缓冲试剂的pH为7.2～7.4，且所述缓冲试剂中含有DTT、N-乙酰-L-半胱氨酸和蛋白酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述用于蜘蛛丝腺组织染色质交联效果的缓冲试剂，其特征在于，所述DTT的终浓度为5～15mM，所述N-乙酰-L-半胱氨酸的终浓度为1％～3％。

3.一种用于蜘蛛丝腺组织染色质交联的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、取蜘蛛丝腺组织并于液氮中研磨成粉，加入权利要求1所述的缓冲试剂多次离心清洗；

S2、采用缓冲液重悬步骤S1所得沉淀，加入甲醛进行交联，再采用甘氨酸终止交联；

S3、离心弃上清，再用缓冲液重悬沉淀得到交联样本。

4.根据权利要求3所述用于蜘蛛丝腺组织染色质交联的方法，其特征在于，所述步骤S1具体为：

S11、将蜘蛛丝腺组织在液氮中研磨成粉末，用权利要求1所述缓冲试剂重悬，并于4℃、500g～700g离心5～10min，吸弃上清；

S12、用权利要求1所述缓冲试剂重悬S11所得沉淀，细胞筛过滤，滤液于4℃、500g～700g离心5～10min，吸弃上清；

S13、重复步骤S12 1～2次。

5.根据权利要求3所述用于蜘蛛丝腺组织染色质交联的方法，其特征在于，步骤S2和S3所述缓冲液为含有蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液。

6.根据权利要求3所述用于蜘蛛丝腺组织染色质交联的方法，其特征在于，还包括步骤S4：取交联样本并加入CTAB提取液和β-巯基乙醇，混匀后孵育，再用酚-氯仿-异戊醇抽提DNA，所得沉淀加入TE Buffer复溶，最后采用琼脂糖凝胶电泳检测交联效果。

7.根据权利要求6所述用于蜘蛛丝腺组织染色质交联的方法，其特征在于，步骤S4所述的交联样本中还添加有蛋白酶K。