[发明专利]一种卵巢脱细胞水凝胶制备方法

权利要求书

1.一种卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，包括脱细胞过程和水凝胶制备过程；

所述脱细胞过程包括：将新鲜卵巢采用脱细胞技术处理后得到脱细胞后的卵巢组织；

所述水凝胶制备过程包括：将脱细胞后的卵巢组织依次经过酶消化、杂质萃取以及温度孵化得到卵巢脱细胞水凝胶。

2.根据权利要求1所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，所述脱细胞过程具体包括：

步骤T1：将完整的新鲜卵巢冲洗干净，然后冷冻；

步骤T2：对冷冻后的卵巢进行解冻，然后进行多孔针刺处理；

步骤T3：采用化学脱细胞试剂对多孔针刺处理后的卵巢进行浸泡处理；

步骤T4：对浸泡处理后的卵巢进行洗涤，得到脱细胞后的卵巢组织。

3.根据权利要求2所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤T1具体包括：用无菌PBS反复冲洗所述新鲜卵巢直至其干净，然后将冲洗干净的卵巢放入50ml试管中并于-80℃的温度下冷冻24小时。

4.根据权利要求2所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤T2具体包括：冷冻后卵巢在37℃的水浴中放置30分钟进行解冻，然后用针灸针对解冻后的卵巢行多孔针刺处理。

5.根据权利要求2所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤T3具体包括：

步骤T301：将多孔针刺处理后的卵巢用含0.5％十二烷基硫酸钠的去离子水处理2小时；

步骤T302：将经过所述步骤T301处理后的卵巢置于含1％TritonX-100的去离子水中8小时。

6.根据权利要求2所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤T4具体包括：

步骤T401：将所述步骤T3处理后的卵巢置于DI-H2O中充分洗涤9小时；

步骤T402：将经过所述步骤ST401处理后的卵巢置于含2％脱氧胆酸盐的去离子水中8小时；

步骤T403：将经过所述步骤T403处理后的卵巢在去离子水中洗涤6小时后得到脱细胞后的卵巢组织，其中，使用的去离子水每2小时更换一次。

7.根据权利要求1所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，所述水凝胶制备过程具体包括：

步骤S1：将脱细胞后的卵巢组织进行酶消化，得到脱细胞组织源性细胞外基质溶液；

步骤S2：将脱细胞组织源细胞外基质溶液与10％(v/v)10倍磷酸盐缓冲盐水按10:1的比例混合；

步骤S3：将经过所述步骤S2处理后的脱细胞基质溶液转移到超滤管中，在6000g4℃条件下离心2小时，收取浓缩的脱细胞基质液；

步骤S4：对得到的浓缩的脱细胞基质液进行PH值调节，使PH值调整为7.4，得到预凝胶溶液；

步骤S5：对得到的预凝胶溶液进行孵育，得到卵巢脱细胞水凝胶。

8.根据权利要求7所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：将脱细胞后的卵巢组织剪刀剪碎，用浓度为4mg/ml的胃蛋白酶在浓度为0.02M的中消化72小时，然后得到脱细胞组织源性细胞外基质溶液。

9.根据权利要求7所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，在所述步骤S4中，浓缩的脱细胞基质液的PH值调节在4℃的条件下进行。

10.根据权利要求7所述的卵巢脱细胞水凝胶制备方法，其特征在于，在所述步骤S5中，将得到的预凝胶溶液在37℃的温度下孵育30分钟。