[发明专利]自发型皮肤型红斑狼疮动物模型的构建方法及应用

说明书

本发明公开了一种自发皮肤型红斑狼疮动物模型的构建方法，通过小范围敲除角质形成细胞中的PPARγ（Peroxisome proliferator‑activated receptor gamma）使小鼠自发出现皮肤型红斑狼疮表型，包括局部皮肤炎性表型、脱毛，组织学检查有真皮免疫细胞浸润，基底膜带IgG沉积；同时不存在蛋白尿、肾小球IgG沉积、血清自身抗体等系统性红斑狼疮样改变。本动物模型模拟了皮肤型红斑狼疮的临床症状，为皮肤型红斑狼疮的相关研究提供了重要工具。

技术领域

本发明属于疾病动物模型构建方法技术领域，具体涉及一种皮肤型红斑狼疮的动物模型的构建。

背景技术

皮肤型红斑狼疮(Cutaneous lupus erythematosus,CLE)是一组临床表现多样的自身免疫性皮肤病，根据不同的病情进展可分为多种亚型，不同亚型的皮损表现、病程及预后均不相同，包括急性、亚急性、慢性和间歇性CLE。其中，慢性CLE可进一步分为盘状LE、疣状LE、深部LE、冻疮性LE和Blaschko线状LE等亚类。CLE共同的组织学特征包括界面皮炎和真皮-表皮交界处自身抗体的沉积。CLE的发病率约为4.2/10万，略高于SLE的发病率(3/10万)。女性的发病率高于男性(5.8/10万比2.4/10万)，发病年龄在30～69岁之间。CLE的患病率为70.4/10万，女性患病率亦较男性高(85.1/10万比56.9/10万)，患病年龄高峰在50～59岁。5％至25％的CLE患者可在病程中进展为系统性红斑狼疮(Systemic lupuserythematosus,SLE)，严重威胁患者的健康。

CLE的发病机制涉及多种因素，包括遗传、表观遗传学和环境因素等影响，各种遗传和环境诱因促进T细胞、B细胞、嗜中性粒细胞、抗原呈递细胞和NK细胞浸润到病变皮肤中。目前的观点认为，CLE的致病途径除了树突细胞激活、T细胞失调、细胞因子失衡、B淋巴细胞缺陷和自身抗体产生外，还有紫外线照射刺激角质形成细胞产生固有免疫相关的细胞因子，并触发细胞死亡，从而激活核酸信号通路。CLE的一线治疗药物主要是抗疟药物和糖皮质激素，而免疫抑制剂、沙利度胺和阿维A用于顽固性CLE的治疗。目前CLE依旧缺乏有效的治疗方式，更好地了解驱动CLE的遗传、环境和免疫调节因素可能为CLE的治疗提供重要依据。然而，对于CLE的发病机制或导致CLE患者进展为SLE的机制知之甚少，部分原因是缺乏合适的动物模型。因此，与CLE患者具有相似遗传背景，能模拟临床症状、又兼具成本优势的自发型动物模型，对研究CLE发病机制及安全有效的新型疗法具有重要意义。

迄今为止，大多数LE模型都集中在SLE上，包括NZB/W F1小鼠、MRL/lpr小鼠、BXSB/Yaa小鼠和新开发的PD-1H KO小鼠。这些典型的狼疮小鼠模型很少表现出明显的皮肤损害且皮损异质性很大，病理过程与患者差异巨大，并且缺乏人类CLE的许多关键特征。此外，这些模型需要6个月或更多的时间出现皮损表型，耗时久。新近开发的CLE小鼠模型有IL-21诱导的人源化CLE小鼠模型，该模型需要注射源自活动性SLE患者的异常免疫细胞，并使用UVB照射诱发狼疮样皮肤表现的发展，其缺点在于操作复杂，同时小鼠模型存在UVB导致的急性损伤表型，与CLE患者临床表现不符。

PPARγ(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma，过氧化物酶体增殖物激活受体γ)是PPAR通路的关键分子，能调控脂肪细胞分化和功能，调控免疫细胞的成熟和功能，影响组织和器官的细胞增殖，其信号失调还与肿瘤生成有关。目前尚未见到利用角质形成细胞条件性PPARγ敲除小鼠构建自发型CLE动物模型的报道。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，为CLE的发病机制、病理特征、治疗方法研究和开发提供一种新的自发型CLE动物模型。

为实现上述技术目的，本发明公开了一种自发皮肤型红斑狼疮动物模型的构建方法，包括如下步骤：