[发明专利]用于血清半乳糖凝集素-3检测的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒及其该试剂盒制备

说明书

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于血清半乳糖凝集素‑3检测的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒及其该试剂盒制备。本发明提供了组合物及其在制备Gal‑3检测试剂盒中的应用。Gal‑3分子量小，做成商业化诊断产品较难满足重复性、稳定性要求。本发明将抗体‑抗原反应的高度特异性与三联吡啶钌发光的高度灵敏性结合起来，利用三联吡啶钌在DBAE下产生的光子以检测产物浓度，提高了灵敏度、稳定性、重复性，缩短反应时间、抗干扰性高、操作简单。

技术领域

本发明涉及电化学检测领域，特别涉及用于血清半乳糖凝集素-3检测的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒及其该试剂盒制备。

背景技术

慢性心力衰竭(chronicheartfailure，CHF)是一种以心室射血功能严重受损、外周血流分布异常为主要特征的临床综合征，其病理过程主要表现为心脏重塑和心肌纤维化，因其发病率高、预后不良导致该病死亡率较高。

血清Gal-3是可溶性β-半乳糖苷结合凝集素，是一个相对分子质量为30kDa、与G-半乳糖苷结合的蛋白，参与多种生物活性，主要已知的是其介导肿瘤生长，侵袭和转移，同时它也与年龄的增长，糖尿病肾病，纤维变性疾病如肝纤维化、肾纤维化、特发性肺纤维化和慢性胰腺炎相关。与心脏纤维化和心肌重构相关，能促进心脏成纤维细胞增殖，胶原沉积和心室功能障碍。

Gal-3作为炎性反应的重要介质，在心肌重构和心力衰竭的病理发展过程中有重要作用，心力衰竭患者血浆Gal-3水平表达越高，越易进展为心力衰竭恶化，住院率与病死率也越高。血清Gal-3能促进心肌巨噬细胞的活化和迁移，加速成纤维细胞增殖以及胶原蛋白沉积，导致心脏重塑以及心肌纤维化，而心脏重塑和心肌纤维化正是影响慢性心力衰竭的重要决定性因素。血清Gal-3在人体组织器官中表达的普遍性，使血清Gal-3产生不受特定条件的限制。因此近年来，国内外逐渐将血清Gal-3作为心力衰竭的重要诊断指标。目前，Gal-3已成为欧美国家临床诊断与评估心力衰竭患者近期预后的重要指标。除此之外，Gal-3还可用于各种脏器的纤维化，包括且不限于：心脏、肾脏、肝脏等。

到目前为止，虽然认为Gal-3可用于动态或急性心衰患者的附加风险分层，但迄今为止，Gal-3很少用于常规临床患者检查。用于检测人血清中血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)的方法主要有：酶联免疫法(ELISA)和酶促磁微粒化学发光。Gal-3分子量较小，且在各个组织器官中都有，正常人当中也有，因此其检测数据基础数据较高，现有技术及产品检测的重复性、灵敏度、特异性、稳定性和检测时间长等不能满足商业化的临床诊断的需要。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了用于血清半乳糖凝集素-3检测的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒及其该试剂盒制备。本发明提供了组合物及其在制备血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)磁微粒电化学发光检测试剂盒中的应用。本发明通过实验发现将抗体-抗原反应的高度特异性与三联吡啶钌发光的高度灵敏性结合起来，利用三联吡啶钌在DBAE下产生的光子以检测产物浓度，具有灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了组合物，包括含有生物素标记的可特异性结合Gal-3的抗体、含有三联吡啶钌标记的可特异性结合Gal-3的抗体和链霉亲和素超顺磁微球；

所述链霉亲和素超顺磁微球的粒径包括1.0～6.0μm。

在本发明的一些具体实施方案中，所述可特异性结合Gal-3的抗体包括抗Gal-3单克隆抗体。

在本发明的一些具体实施方案中，可特异性结合Gal-3的抗体分子表面的生物素分子标记量包括2～5个。

在本发明的一些具体实施方案中，所述可特异性结合Gal-3的抗体包括抗Gal-3单克隆抗体。

在本发明的一些具体实施方案中，所述可特异性结合Gal-3的抗体分子表面的钌分子标记量包括2～10个。