[发明专利]一种评价化妆品及其原料的抗羰基化功效的方法

说明书

本发明提供一种评价化妆品及其原料的抗羰基化功效的方法，包括如下步骤：将同期的线虫进行分组培养：样品组的培养物中含有化妆品及其原料的待测样品；对照组的培养物中不含待测样品，其他培养条件与样品组一致；对培养后的线虫进行荧光检测，计算得到待测样品对于线虫荧光强度的抑制率，抑制率越大说明待测样品的抗羰基化功效越强。本发明基于线虫模型建立的方法的优势有：实验周期短、能高通量筛选原料；实验耗材成本低；线虫属于低等真核生物，不存在伦理学冲突等。能够实现对样品进行定量分析，数据可视化，能更好直观的展示化妆品/原料的抗羰基化效果。

技术领域

本发明属于化妆品与生物技术领域，涉及一种评价化妆品及其原料的抗羰基化功效的方法。

背景技术

蛋白质羰基化被视为氧化应激和衰老的生物标志物，是蛋白质非酶促不可逆的羰基修饰。蛋白质可与不同来源的活性羰基类物质反应，生成蛋白质羰基加合物，也能自身氧化生成蛋白质羰基衍生物。随机体对羰基化蛋白质的降解能力的减弱和羰基化蛋白质的生成速率的加快，导致蛋白质和细胞功能的降低和丧失，加速老年色素的累积，启动或促进老年退行性疾病的生理病理过程，最终加快衰老的进程。诸多研究表明，羰-氨交联启动的蛋白质的交联聚合是老年色素形成的核心生化机制。

目前关于蛋白质氧化损伤羰基化的检测主要有如下几种：蛋白技术相关的科研人员一般先从大小鼠、线虫等动物组织样本提取蛋白，然后通过2，4-二硝基苯肼法测定羰基化蛋白，涉及蛋白提取步骤，操作复杂，而且动物实验个体差异较大，导致测得结果不稳定，误差较大，尤其是线虫本身蛋白含量较低，因此对其羰基化检测比较困难。化妆品领域一般使用细胞实验(检测角质细胞中蛋白酶体的活性)或建立皮肤模型(丙烯醛诱导皮肤模型DNPH染色检测组织羰基化反应)，然而这两种方法成本高且技术门槛高。

因此，如何开发一种简单、高效的蛋白质氧化损伤羰基化的检测方法，并将其用于评价化妆品及其原料中，将为抗羰基化活性原料在产品开发应用方面提供启示和理论参考。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种评价化妆品及其原料的抗羰基化功效的方法。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种评价化妆品及其原料的抗羰基化功效的方法，所述方法包括如下步骤：

将同期的线虫进行分组培养：样品组的培养物中含有化妆品及其原料的待测样品；对照组的培养物中不含待测样品，其他培养条件与样品组一致；对培养后的线虫进行荧光检测，计算得到待测样品对于线虫体内蛋白羰基化的抑制率，抑制率越大说明待测样品的抗羰基化功效越强。

优选地，所述线虫包括秀丽线虫。

优选地，所述线虫包括野生型N2线虫、fzo-1线虫或mev-1线虫中的任意一种。

优选地，所述同期的线虫包括L4期线虫幼虫。

优选地，所述培养的时间为5～10天。

优选地，所述培养物中包括大肠杆菌菌液。

优选地，所述样品组的培养物中，待测样品与大肠杆菌菌液的质量比为(2～10):(90～98)。

所述(2～10)中的具体数值例如2、3、4、5、6、7、8、9、10等。

所述(90～98)中的具体数值例如90、91、92、93、94、95、96、97、98等。

优选地，所述大肠杆菌菌液由包括如下步骤的方法培养得到：

将大肠杆菌接种于LB液体培养基中，于37℃下培养至OD₆₀₀为0.4～0.6，即得所述大肠杆菌菌液。