[发明专利]核糖核酸生物传感器、及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了核糖核酸生物传感器、及其制备方法和应用，制备方法包括如下步骤：1）、将10~200重量份的寡核苷酸载体在0.01~0.2重量份的寡核苷酸溶液中进行培养，得到寡核苷酸载体A；2）、将步骤1）得到的寡核苷酸载体A、20~200重量份的碳化二亚胺、5~50重量份的N‑羟基硫代琥珀酰亚胺、50~500重量份的寡核苷酸靶标物进行混合反应2~24小时，得到寡核苷酸载体B；3）、向步骤2）得到的所述寡核苷酸载体B中加入携带有靶向序列的cas13a。本发明研制出了基于cas13a的高灵敏度核糖核酸生物传感器，其检测灵敏度高，且使用较为方便。

技术领域

本发明核糖核酸生物传感器、及其制备方法和应用。

背景技术

核糖核酸病毒是自然界分布最广的病毒，它们中的有些种类严重威胁人类健康和生命。迄今为止，很少有医治病毒感染的特效药，对抗病毒感染主要手段是接种疫苗。对于已知并且流行很久的核糖核酸病毒，疫苗接种是对付它们最行之有效的方法。与脱氧核糖核酸病毒不同，核糖核酸病毒的极端不稳定性使它们经常产生变异，例如常见的流感病毒就分为甲、乙、丙三种类型和几十个亚类型，每年流感流行的时候，首先要确定其种类，然后接种相应的疫苗来预防。

目前有两种主要的新型冠状病毒检测方法：抗原检测和以聚合酶链反应 （PCR）为基础的实时荧光定量PCR。抗原检测以其快速方便等特点，非常适合家庭自检，但是，现阶段只能作为一种辅助手段。新型冠状病毒检测的“黄金标准”是实时荧光定量PCR，其严苛的样品处理和检测设备要求，使新型冠状病毒检测只能在基础设施完善的中心实验室进行。

发明内容

一方面，本发明提供了核糖核酸生物传感器的制备方法，包括如下步骤：

1）、将10~200重量份的寡核苷酸载体在0.01~0.2重量份的寡核苷酸溶液中进行培养，得到寡核苷酸载体A；其中，所述寡核苷酸载体包括金电极或包裹有亲和素的磁珠；

2）、将步骤1）得到的寡核苷酸载体A、20~200重量份的碳化二亚胺、5~50重量份的N-羟基硫代琥珀酰亚胺、50~500重量份的寡核苷酸靶标物进行混合反应2~24小时，得到寡核苷酸载体B；所述寡核苷酸靶标物包括N6-（6-氨基己基）黄素腺嘌呤二核苷酸、表面带有氨基的量子点或表面带有氨基的普鲁士兰纳米粒子；

3）、向步骤2）得到的所述寡核苷酸载体B中加入携带有靶向序列的cas13a。

作为优选，所述靶向序列包括5’ -UUGCUGCUGCUUGACAGAUU-3’ 、5’-AACUAUACAACCUACUACCUCA-3或5’-UUACUCCUUGGAGGCCAUGUAGG-3’。

作为优选，在步骤1）中，所述寡核苷酸载体，50~120重量份；所述寡核苷酸溶液，0.02~0.1重量份。

作为优选，在步骤2）中，所述碳化二亚胺，50~120重量份；所述N-羟基硫代琥珀酰亚胺，10~30重量份；所述寡核苷酸靶标物，100~300重量份。

作为优选，在步骤2）中，反应时间为6~15小时。

另一方面，本发明还提供了上述核糖核酸生物传感器的制备方法所制备的核糖核酸生物传感器。

另一方面，本发明还提供了核糖核酸生物传感器的应用，在寡核苷酸靶标物为N6-（6-氨基己基）黄素腺嘌呤二核苷酸时，将靶标核糖核酸和核糖核酸生物传感器混合培养1~30分钟，然后取出寡核苷酸载体，并加入氨基安替比林、2-羟基-3-间甲苯胺丙磺酸钠和过氧化物酶的显色培养液，反应完成后，进行分光光度测定。

另一方面，本发明还提供了核糖核酸生物传感器的应用，在寡核苷酸靶标物为表面带有氨基的量子点时，将靶标核糖核酸和核糖核酸生物传感器混合培养1~30分钟，然后取出寡核苷酸载体，溶液在紫外光下进行测定。