[发明专利]一种构建重组大肠杆菌高效合成血红素的方法

权利要求书

1.一种合成血红素的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌敲除或沉默了编码谷氨酸-1-半醛-2,1-氨基变位酶的hemL基因，并且过表达了球形红细菌的ALAS基因hemA^R。

2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌还过表达了编码大肠杆菌亚铁螯合酶的hemH基因，或编码大肠杆菌胆色素原合酶的hemB基因。

3.根据权利要求1-2任一所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述hemL基因编码的氨基酸序列是NCBI上GenBank为CAQ30669.1的序列；hemA^R基因编码的氨基酸序列是NCBI上GenBank为AAA72325.1的序列；hemH基因编码的氨基酸序列是NCBI上GenBank为CAQ30948.1的序列；hemB基因编码的氨基酸序列是NCBI上GenBank为CAQ30840.1的序列。

4.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述hemL基因是通过Red同源重组的方法进行敲除。

5.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌是在大肠杆菌BL21(DE3)的基础上构建得到的。

6.一种提高大肠杆菌血红素产量的方法，其特征在于，所述方法包括敲除或沉默编码谷氨酸-1-半醛-2,1-氨基变位酶的hemL基因，并且过表达球形红细菌的ALAS基因hemA^R。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法过表达了编码亚铁螯合酶的hemH基因或编码胆色素原合酶的hemB基因。

8.一种生产血红素的方法，其特征在于，所述方法包括利用权利要求1-5任一所述的重组大肠杆菌进行发酵生产。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述发酵是将重组菌以1～5％的接种量接入发酵培养基中，在30～37℃条件下培养至OD600为0.6-0.8，加入终浓度0.1～0.5mmol·L^-1的IPTG，诱导培养8～16h。

10.权利要求1-5任一所述的重组大肠杆菌或权利要求6-7任一所述的提高大肠杆菌血红素产量的方法在合成血红素中的应用。