[发明专利]微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法

权利要求书

1.微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

包括如下步骤：

(1)选取正常细胞、来源于三胚层的不同癌细胞做实验组；

(2)各实验组细胞接种于微流控芯片进行动态培养，添加硼药培养，培养过程检测细胞活力；

(3)硼药培养结束后对细胞进行前处理，高效液相色谱仪测定各实验组细胞内B¹⁰浓度。

2.根据权利要求1所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述步骤(3)得出各实验组细胞内硼药浓度后，进行步骤(4)分别计算不同癌细胞内B¹⁰浓度和正常细胞B¹⁰浓度之间比例，比例值大于2.5，该种癌症是硼药适应症，否则不是。

3.根据权利要求2所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述正常细胞包括血液细胞、正常组织细胞，所述三胚层的不同癌细胞是从内中外三胚层各选择三种不同癌症细胞得到的，癌细胞选自原发性肿瘤细胞、转移性肿瘤细胞。

4.根据权利要求3所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述癌细胞包括脑部肿瘤细胞，复发性头颈部肿瘤细胞，恶性黑色素瘤细胞。

5.根据权利要求1或3所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述癌细胞选自肺癌细胞、肝癌细胞、膀胱癌细胞、淋巴瘤细胞、纤维肉瘤细胞、子宫癌细胞、黑色素瘤细胞、脑胶质瘤细胞、鼻咽癌细胞；

所述硼药是BPA。

6.根据权利要求3所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述不同癌细胞内B¹⁰浓度和正常细胞B¹⁰浓度之间比例是指B¹⁰在肿瘤细胞中的浓度/B¹⁰在正常组织细胞中的浓度，以及B¹⁰在肿瘤细胞中的浓度/B¹⁰在血液细胞中的浓度。

7.根据权利要求1所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述步骤(2)详细过程包括：将各实验组细胞以细胞密度为5×10⁵个·cm^－2分别接种于相应微流控芯片中，此时开始计算培养时长，细胞贴壁或培养到24h后，将相应的细胞培养液以0.2μL·min^－1的流速经微量注射器注入芯片中，排出原来的细胞培养液后，进行动态培养，使用微量注射器往各实验组注入硼药培养。

8.根据权利要求1或7所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述硼药注入微流控芯片后的终浓度选自300μg/g、350μg/g、400μg/g、450μg/g、500μg/g、550μg/g。

9.根据权利要求1所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述步骤(3)中随着培养时长增长但各实验组癌细胞的细胞活力下降平缓或者培养到72h，结束硼药培养，采用外标法测定各实验组细胞内硼药浓度，使用高效液相色谱(HPLC)对各细胞样品、对照品进行数据采集，根据对照品峰面积绘制标准曲线，得回归方程，经单点校正法校正后，将获得的各细胞样品原始高效液相色谱数据进行峰识别、峰对齐、基线矫正和峰面积归一化法预处理，然后导入计算软件进行统计分析，评估各实验组细胞内的BPA的摄取情况，计算肿瘤细胞、正常细胞中B¹⁰的浓度。

10.根据权利要求1或9所述的微流控高效液相色谱联动三胚层定位癌细胞内硼药浓度测定方法，其特征在于：

所述步骤(3)中，高效液相色谱采集参数包括：C18色谱柱(5μm，4.6×250mm)；流动相A：0.1％磷酸溶液流动相B：乙腈；洗脱程序：0min95％A5％B；5min80％A20％B；12min50％A50％B；20-25min15％A85％B；柱温:30℃；进样量:10.0μL；流速:1.0mL/min；检测波长:580nm。