[发明专利]间充质干细胞生产外泌体的无血清培养基及其制备与用途

权利要求书

1.一种无血清培养基，其特征在于：所述无血清培养基包括基础培养基及添加剂，所述添加剂包括含量介于0.5g/L与5g/L之间的人血清白蛋白、含量介于5mM与15mM之间的HEPES、含量介于1mM与10mM之间的氯化锂、含量介于1mg/L与10mg/L之间的亚硒酸钠、含量介于1mg/L与20mg/L之间的转铁蛋白、含量介于1mg/L与20mg/L之间的胰岛素、含量介于1mg/L与10mg/L之间的乙醇胺、含量介于10mg/L与100mg/L之间的维生素C、含量介于1mg/L与10mg/L之间的生物素、含量介于1mg/L与20mg/L之间的还原型谷胱甘肽、含量介于0.1％(v/v)与1％(v/v)之间的脂质浓缩液、含量介于1nM与10nM之间的地塞米松、含量介于0.1g/L与1g/L之间的聚乙烯醇、含量介于0.5mg/L与5mg/L之间的AWRK6、含量介于1μM与10μM之间的p53通路抑制剂、含量介于1μM与10μM之间的p38 MAPK通路抑制剂、含量介于10μg/L与50μg/L之间的EGF、含量介于5μg/L与50μg/L之间的PDGF-BB，以及含量介于5μg/L与50μg/L之间的bFGF。

2.如权利要求1所述的无血清培养基，其特征在于：所述无血清培养基进一步包括含量介于5μM与30μM之间的去甲肾上腺素、含量介于5μM与30μM之间的激动剂AdipoRon，以及含量介于0.1mg/L与5mg/L之间的细胞松弛素D。

3.如权利要求1或2所述的无血清培养基，其特征在于：所述基础培养基包括DMEM/F12、α-MEM或DMEM。

4.如权利要求1或2所述的无血清培养基，其特征在于：所述脂质浓缩液包括含量为2mg/L的花生四烯酸、含量为220mg/L的胆固醇、含量为70mg/L的DL-α-生育酚醋酸、含量为10mg/L的亚油酸、含量为10mg/L的亚麻酸、含量为10mg/L的肉豆蔻酸、含量为10mg/L的油酸、含量为10mg/L的棕榈酸、含量为10mg/L的棕榈油酸，以及含量为2mg/L的硬脂酸。

5.如权利要求1或2所述的无血清培养基，其特征在于：所述添加剂中的脂质浓缩液的含量是介于0.5％(v/v)与1％(v/v)之间。

6.如权利要求1或2所述的无血清培养基，其特征在于：所述p53通路抑制剂包括Pifithrin-α，及所述p38 MAPK通路抑制剂包括SB 202190。

7.如权利要求1或2所述的无血清培养基，其特征在于：所述转铁蛋白包括重组人转铁蛋白；所述胰岛素包括重组人胰岛素；所述EGF包括重组人EGF；所述PDGF-BB包括重组人PDGF-BB；及所述bFGF包括重组人bFGF。

8.一种如权利要求1至7中任一项所述的无血清培养基的制备方法，其特征在于：所述方法包括步骤：将所述人血清白蛋白、所述HEPES、所述氯化锂、所述亚硒酸钠、所述转铁蛋白、所述胰岛素、所述乙醇胺、所述维生素C、所述生物素、所述还原型谷胱甘肽、所述脂质浓缩液、所述地塞米松、所述聚乙烯醇、所述AWRK6、所述p53通路抑制剂、所述p38 MAPK通路抑制剂、所述EGF、所述PDGF-BB及所述bFGF溶于超纯水或DMSO中配成浓缩液；以及将所述浓缩液溶于所述基础培养基中，并过滤除菌。

9.一种如权利要求1至7中任一项所述的无血清培养基的用途，其特征在于：所述无血清培养基用于间充质干细胞的体外培养及增殖、用于维持所述体外培养的间充质干细胞的细胞活性、用于促进所述间充质干细胞的生成及分泌外泌体，或用于制备包含所述间充质干细胞的外泌体的产品。

10.如权利要求9所述的无血清培养基的用途，其特征在于：所述间充质干细胞包括人脐带间充质干细胞。

11.如权利要求9所述的用途，其特征在于：所述体外培养包括2D细胞培养或3D细胞培养。