[发明专利]一种油麦吊云杉共生真菌及应用

说明书

本发明属于微生物技术领域，特别涉及一种油麦吊云杉共生真菌及应用，该真菌的保藏名称为毛霉（Mucor sp.）YAFEF025，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2022611，保藏时间为2022年05月12日。本发明通过分离筛选油麦吊云杉共生真菌，得到一株具有抗菌活性的真菌YAFEF025，通过实验发现，YAFEF025菌丝体提取物对蜡样芽孢杆菌、缓慢芽孢杆菌、副溶血性弧菌、铜尿假单胞菌等细菌具有较好的耐药性，为研究开发新的抗细菌药物提供新的途径。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，特别涉及一种油麦吊云杉共生真菌及应用。

背景技术

内共生真菌（endophytic fungus）是存在于健康植物的组织和器官内部中，形成不明显浸染的各种真菌，是植物微生态系统的天然组成部分。目前，已从藻类、苔藓、蕨类、裸子植物和被子植物中所有研究过的植物中分离得到了内共生真菌，表明内共生真菌在植物体内广泛存在。内共生真菌系统地分布于植物的根、茎、叶、花、果实和种子等器官、组织的细胞或细胞间隙，其分布情况取决于宿主植物本身以及内共生真菌的种类,在宿主植物不同器官的分布存在差异，不同的内共生真菌占据不同的生态位。同时，还受到地理位置、气候条件等诸多环境因子的影响。

研究表明，在长期共进化过程中，共生菌与宿主植物形成了特殊的生理代谢途径，产生出各种结构新颖的活性化合物，目前还有很多活性共生菌未被开发，对我们开发新的抗菌药物有重要的作用，能有效缓解耐药菌株带来的危机。目前内共生菌的初级代谢和次生代谢产物已成为研究热点，事实证明内共生真菌能够参与植物活性成分的合成，或者对植物次级代谢产物进行转化。有研究者在植物三尖衫、南方红豆衫和香榧中分离到170多株的内共生真菌，其中有近90株的内共生真菌能产生抑制和杀灭一种或多种植物病原真菌的活性物质，这些内共生真菌主要分布于拟青霉属、镰孢菌属等。

油麦吊云杉为（Picea brachytyla var. complanata）松科云杉属麦吊云杉的变种，是中国特有种，属于国家Ⅱ级重点保护野生植物。主要分布于四川东北部及岷江流域上游，甘南地区白龙江流域，陕西东南部、湖北西部，青海省泽库、班玛等地区，地势高峻，以2000~3000m海拔为主。树种生长适应性强、材质优良、病虫害较少，有较高的经济效益及生态价值，是高海拔森林更新或荒山造林的首选优势树种。

发明内容

本发明提供一种油麦吊云杉共生真菌及应用，其抗细菌活性强。

本发明通过下述技术方案实现：

 一方面，本发明提供一种油麦吊云杉共生真菌，该真菌的保藏名称为毛霉（Mucorsp.）YAFEF025，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2022611，保藏时间为2022年05月12日。

进一步地，所述油麦吊云杉共生真菌包括如SEQ ID No.1与SEQ ID No.2所示的引物，所述油麦吊云杉共生真菌的ITS基因序列如SEQ ID No.3所示。

另一方面，本发明还提供一种油麦吊云杉共生真菌在制备抗细菌药物中的应用。

另一方面，本发明还提供一种菌剂，包括上述的油麦吊云杉共生真菌的菌丝体粗提取物和/或细胞裂解上清液和/或细胞裂解沉淀。

进一步地，所述菌丝体粗提取物的提取方法，包括以下步骤：

 （1）将油麦吊云杉树皮共生菌的菌丝体刮取规格为60mm的培养皿中四分之一的菌丝放入2mL灭菌离心管中，再加入1mL无菌水，破碎2min，然后将破碎样品液取500µL分别接种到每个装有培养基的350mL的组培瓶中，置于26℃恒温培养箱中，培养10d；

所述培养基包括如下组分：核桃渣8g/瓶与液体培养基15mL/瓶，所述液体培养基包括：硝酸钠6g/L、氯化钾0.52g/L、七水硫酸镁0.52g/L与磷酸二氢钾1.52g/L；