[发明专利]PD-L1蛋白抗体、试剂盒和用途

说明书

本发明属于分子免疫学领域。具体地，涉及一种特异性靶向PD‑L1蛋白的抗体，及包括该抗体试剂盒以及其用途。提供一种分离的PD‑L1蛋白抗体或其抗原结合片段，其重链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。轻链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。

技术领域

本发明属于分子免疫学领域。具体地，涉及一种特异性靶向PD-L1蛋白的抗体，及包括该抗体试剂盒以及其用途。

背景技术

PD-1是表达在活化的T细胞，B细胞，巨噬细胞，调节性T细胞(Tregs)和自然杀伤性(NK)细胞上的抑制受体。它有两个结合配体---正常细胞上表达的PD-L1和PDL-2(B7家族)，PD-1与任一配体的结合均会抑制T细胞活性，诱导T细胞耐受，抑制增殖，降低T细胞的免疫反应并诱导细胞死亡，从而阻止免疫细胞活化杀伤正常细胞。恶性肿瘤利用了这一机制，它在表面大量表达PD-L1/2，减少T细胞激活和抗原特异性T细胞免疫应答，从而绕过免疫监视。因此，阻断PD-1和PD-L1/2的结合，就能够激活T细胞的杀伤功能，从而杀伤肿瘤细胞。FDA批准了首个抗PD-1单克隆抗体Keytruda，紧接着批准nivolumab，成为恶性肿瘤当之无愧的明星产品。至2021年已有近10种抗-PD-1和抗PD-L1的抗体药物走向临床。与治疗癌症的其他方法相比，免疫治疗最大的优势就是它借助的是免疫系统的能力，除了比放射、化疗、手术等传统方法更加安全以外，它还能对特定的肿瘤形成适应性和特异性，形成类似抗原的持久记忆力，这对于防止肿瘤复发有重要的意义。

然而目前免疫治疗仍然面临难题，主要包括：(1)抗PD-1/L1治疗诱导的免疫相关不良事件(irAEs)，例如脑膜神经根炎，多发性神经根炎，心律不齐等。有报道称PD-1抑制剂pembrolizumab引起心肌炎和急性心力衰竭。(2)非特异性生物标志物，PD-L1的表达是一种经过验证且重要的预测生物标志物。然而仅此是不够的，仅凭此不足以确定哪些患者可以接受PD-1/L1阻断治疗。肿瘤表达最高水平的PD-L1/2是对治疗最好的应答这一假说也尚未得到肯定。而目前临床普遍采用的是以PD-L1的表达水平作为筛选患者的生物学标志物，完全无法满足临床需求。研究证实，PD-L1表达水平作为预测抗PD-1/L1治疗敏感性的指标，预测效力不足60％，高PD-L1表达的患者部分对抗PD-1/L1治疗无效甚至促进肿瘤进展。此外，MSI和dMMR被认为是抗PD-1/L1抗体反应的预测性生物标志物，然而，这也是不够的，因为它们在许多癌症中经常被观察到，缺乏特异性。(3)PD-1抑制剂的成本效益，从经济角度看，PD-1阻断单一疗法通常比其他免疫疗法和常规癌症疗法更昂贵，患者经济压力巨大。基于以上原因，筛选出可能对抗PD-1/L1治疗有效的人群尤为重要，可以减少患者不必要的治疗和承受副作用的风险，减轻患者经济负担。

因此，本领域需要一种产品，其能够作为一种新型的免疫检查点抑制剂，并且灵敏度高特异性好，为癌症的检测和/或治疗提供更多额外的选择。

发明内容

有鉴于此，第一方面，本发明提供一种分离的PD-L1蛋白抗体或其抗原结合片段，其重链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQID NO.2所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。轻链可变区的互补决定区CDR1具有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，CDR2具有如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，CDR3具有如SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列。

本发明通过杂交瘤技术筛选到一株抗PD-L1蛋白特异性的杂交瘤，制备小鼠腹水并纯化抗体，得到能够特异性结合PD-L1蛋白的鼠源性单克隆抗体(mAb)，该抗体对PD-L1蛋白具有较高的亲和力，同时具有靶向PD-L1蛋白的能力。其Kd值为1.15*10^-10M。