[发明专利]一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法

说明书

本发明公开了一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，涉及冻干粉技术领域，具体包括以下步骤：S01：获取：提取血液中的成体充质干细胞；S02：培养基制备：按重量份配比要求准备所需原料DMEM培养液和添加剂，将各原料混合均匀，得到培养基；其中，添加剂包括L‑谷氨酸酰胺、碱性成纤维生长因子、核糖核昔、碳酸氢钠和转化生长因子；S03：培养扩增：用上述培养基对充质干细胞进行增殖培养；S04：收集；S05：浓缩、纯化；S06：冻干。本发明通过在培养基中增加添加剂，利用L‑谷氨酸酰胺、碱性成纤维生长因子、核糖核昔、碳酸氢钠和转化生长因子的配合，使得本发明干细胞增殖速率较快，且能够有效提高细胞收率及活率。

技术领域

本发明涉及冻干粉技术领域，具体是一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法。

背景技术

干细胞，是一类具有自我复制能力和多向分化潜能的细胞，在一定条件下，可以分化成多种功能细胞及组织，同时还具有免疫调节、修复、再生受损组织及衰老器官的生物学功能。研究发现，干细胞具有较高的端粒酵活性，是人体的青春活力因子，随着年齢的増长，人体内的干细胞数会不断降低，増殖分化潜能也不断的衰弱，直接导致衰老和疾病的发生发展。干细胞提取物具有美容、抗衰老、活化机体机能、细胞新生、紫外损伤修复及提高肌肤免疫力等功效。

但是，现有技术中的细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，其制作过程中细胞增殖速率较慢，且细胞收率及活率较低。因此，本领域技术人员提供了一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种细胞培养用的干细胞冻干粉制备方法，所述制备方法具体包括以下步骤：

S01：获取：提取血液中的成体充质干细胞；

S02：培养基制备：按重量份配比要求准备所需原料DMEM培养液和添加剂，将各原料混合均匀，得到培养基；

其中，添加剂包括L-谷氨酸酰胺、碱性成纤维生长因子、核糖核昔、碳酸氢钠和转化生长因子；

S03：培养扩增：用上述培养基对充质干细胞进行增殖培养，培养时间为3～7d；

S04：收集：当充质干细胞生长到70～90％汇合度时，收集充质干细胞上清液；

S05：浓缩、纯化：收集后的上清液至于超滤离心管中，过滤、分离后，进行真空浓缩处理，得到浓缩液，再将浓缩液放入纯化柱中，纯化洗涤后，得到纯化后的充质干细胞浓缩液；

S06：冻干：将上述充质干细胞浓缩液低温冻存凝固后，再进行真空冷冻，升华干燥后，得到干细胞冻干粉。

作为本发明进一步的方案：所述S02中培养基中各原料重量份为：DMEM培养液20～30份、L-谷氨酸酰胺1～3份、碱性成纤维生长因子1～2份、核糖核昔0.1～0.5份、碳酸氢钠0.1～0.3份和转化生长因子0.01～0.1份。

作为本发明再进一步的方案：所述转化生长因子为转化生长因子β1。

作为本发明再进一步的方案：所述S03中的培养扩增，在20～30℃下，饱和湿度5％CO₂条件下进行。

作为本发明再进一步的方案：所述S05中超滤离心时间为0.5～1h，后加盐水重复超滤离心洗涤一次，收集后浓缩原液。

作为本发明再进一步的方案：所述S05中的超滤截留分子量为5～8KD。

作为本发明再进一步的方案：所述S05中的真空浓缩时间为20～50min。