[发明专利]一种水稻叶片核酸的快速纯化及直接基因扩增的方法

权利要求书

1.一种去除水稻叶片中的PCR反应抑制成分，将组织块直接加入到PCR反应体系中进行分子扩增的方法，其特征在于，所述核酸纯化试剂盒包括第一试剂、第二试剂和第三试剂；

所述第一试剂包括5-20ml冰乙酸、10-40ml氯仿和50-80ml无水乙醇，混合而成溶液Ⅰ；

所述第二试剂包括60-100ml甲醇与10-40ml水,混合而成溶液Ⅱ；

所述第三试剂包括50-100ml乙醇与20-40ml水。

2.根据权利要求1所述的核酸纯化试剂盒，其特征在于，在所述的第一试剂中，所述冰乙酸体积为5-15ml，优选为10ml；所述氯仿体积为15-35ml，优选为30ml；所述的无水乙醇体积为55-70ml，优选为60ml。

在所述的第二试剂中，所述甲醇体积为70-95ml，优选为80ml；所述水的体积为15-30ml，优选为20ml。

在所述的第三试剂中，所述乙醇体积为65-80ml，优选为70ml；所述水的体积为25-35ml，优选为30ml。

3.一种使用权利要求1-2任一项所述试剂盒纯化核酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)取新鲜水稻叶片放入2ml指形管中，加入溶液Ⅰ固定核酸，去除杂质；(2)倾去溶液Ⅰ，加入溶液Ⅱ，进一步去除干扰核酸扩增的物质；(3)取出叶片，切割后放入1.5ml指形管中，加入第三试剂，备用。

4.一种使用权利要求1-2任一项所述试剂盒纯化核酸的多样本并行处理方法，所述方法包括以下步骤：(1)取一块96孔的深孔板，在每个孔的底部打一小孔，直径约1mm，备用；(2)取新鲜水稻叶片，切割后依次放入上述深孔板，记录样品名及其所在位置；(3)96孔深孔板放入装有溶液Ⅰ玻璃盒中，样品应完全浸没在液面下，室温放置；取出深孔板，转移到装有溶液Ⅱ玻璃盒中，室温放置；取出叶片，切割后放入1.5ml指形管中，加入第三试剂，备用。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的叶片面积为1cm²，溶液Ⅰ的体积为1.5ml；步骤(2)所述的溶液Ⅱ的体积为1.5ml；步骤(3)所述切割后的叶片组织块面积为1-2mm²的。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)与步骤(2)所述的样品放置时间为10-20分钟，温度为室温；

7.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤(1)在96孔深孔板每个孔的底部打孔，直径约1mm；步骤(2)与步骤(3)所述的样品放置时间为10-20分钟，温度为室温。

8.根据权利要求1～7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法用于提取水稻叶片基因组的核酸；转基因成分的核酸；水稻病原体细菌与病毒的核酸。