[发明专利]含修饰Xa因子的利伐沙班检测试剂盒及检测方法与应用

说明书

本发明适用于生物医学检验测定技术领域，提供了含修饰Xa因子的利伐沙班检测试剂盒及检测方法与应用。所述试剂盒包括Xa因子试剂和发色底物试剂；所述Xa因子试剂包含修饰Xa因子；所述修饰Xa因子表现出对肝素和/或ATIII浓度变化的不敏感性；所述发色底物试剂包含Xa因子底物；所述Xa因子底物可以与利伐沙班竞争结合修饰后Xa因子。本发明的Xa因子试剂与发色底物试剂联合使用，可以有效的抑制样本中肝素和或ATIII对利伐沙班检测的干扰。本发明的试剂盒检测准确率高，重复性好，而且检测步骤简单，有效提高了检测效率。

技术领域

本发明属于生物医学检验测定技术领域，尤其涉及一种含修饰Xa因子的利伐沙班检测试剂盒及检测方法与应用。

背景技术

利伐沙班是一种口服，具有生物利用度的Xa因子抑制剂，其选择性地阻断Xa因子的活性位点，且不需要辅因子（例如抗凝血酶Ⅲ) 以发挥抑制凝血的活性，达到抗血凝的作用。

目前利伐沙班的检测主要利用凝血酶原时间（PT）或利用活化部分凝血活酶时间凝血酶原时间（APTT）以及液相色谱质谱联用的方法等进行。其中凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）的敏感性和特异性较差。而用液相色谱质谱联用的方法虽然可以准确的测量利伐沙班的含量，然而这种方法价格昂贵，操作繁琐。

专利CN 107576799 A公开了一种基于发色底物法来检测利伐沙班的试剂盒，通过Xa因子和其发色底物的相互作用，得到吸光度信号，血浆中的利伐沙班抑制这种酶 ,而利伐沙班含量越高 ,对这种酶的抑制越强，得到的吸光度信号越弱。所以在一定的范围之内,利伐沙班的含量和吸光度的信号是负相关关系。虽然这种方法可以测量血浆中利伐沙班的含量，但当样本中存在肝素时，肝素与样本中的ATIII的复合物也可以结合Xa因子，影响其活力，从而导致最终测试结果的准确性降低。

药物浓度的准确检测在血栓与止血病人进行治疗用药指导方向具有重要临床意义，不准确或错误的结果会影响抗凝或纤溶药物使用的判断，危及患者的生命。因此，当前在血栓与止血相关临床用药监测领域迫切需求一种可以准确监测利伐沙班的含量且易于获得的检测试剂盒。

发明内容

其本发明的目的之一在于提供一种修饰的Xa因子，旨在将其应用于利伐沙班试剂盒中，以解决现有利伐沙班检测方法存在的检测准确性不理想，成本高和使用过程复杂等技术问题。

本发明实施例是这样实现的，一种修饰的Xa因子，其特征在于，所述修饰的Xa因子包括Xa因子及修饰于其上的富含负电荷的基团，所述富含负电荷的基团来源于聚氨基酸类试剂。

更进一步地，所述修饰的Xa因子与富含负电荷的基团以化学键结合，优选共价结合。

更进一步地，所述修饰的Xa因子包括Xa因子在活化剂的存在下与富含负电荷的基团反应，所述富含负电荷的基团与Xa因子的摩尔比大于1。

更进一步地，所述修饰的Xa因子的等电点小于4.5，优选0.5-4.5，1-4，1.5-3.6。

更进一步地，所述Xa因子来源于哺乳动物，优选牛Xa因子。

进一步地，所述修饰Xa因子表现出对肝素和/或ATIII浓度或活性变化的不敏感性。

作为优选，所述富含负电荷的基团主要来自聚氨基酸类试剂。

进一步优选，所述聚氨基酸类试剂包括聚氨基酸或聚氨基酸衍生物；例如，聚谷氨酸、聚天冬氨酸及其衍生物。

本发明的另一目的在于提供一种Xa因子试剂，其特征在于，包括所述修饰的Xa因子。

进一步地，所述修饰Xa因子的浓度为0.1~1.0U/mL。

进一步地，所述Xa因子试剂还至少包括含缓冲液；作为优选，所述缓冲包括但不限于HEPES缓冲液、Tris缓冲液、咪唑缓冲液、巴比妥缓冲液中的至少一种。