[发明专利]一种香米定性及定量的检测引物组、试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开了一种香米定性及定量的检测引物组、试剂盒和检测方法。本发明通过荧光定量PCR的方法，对香米和非香米定性分析，并利用2supgt;‑△△CT/supgt;法检测不同掺假比例香米，对不同品种的香米和非香米有准确识别能力。本发明从基因角度辨别香米，不会受到人为因素的干扰，且对于基质包容性较强，并且能够实现非香米的定量检测，具有较强的实际运用能力。研究利用ARMS‑PCR原理设计引物，分别针对香米和非香米的特异性片段设计引物，针对不同的实验室条件，能通过琼脂糖凝胶电泳实现香米的定性或荧光定量PCR实现香米和非香米的定性判别。进一步的，引入内参引物用于定量计算，通过荧光定量PCR结果计算表达量，可以实现香米掺假检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种香米定性及定量的检测引物组、试剂盒和检测方法。

背景技术

米是人们生活中不可或缺的主食来源，香气是优质粮食的一个重要品质特征，香米由于良好的香气更受到消费者的青睐。香米香软可口、营养丰富，市场售价普遍高于普通米。香气或气味不仅是米饭的烹饪品质，也是米饭的食用品质。米香是大米消费者普遍期望的一种特性。因此，具有强烈香味的水稻品种成为消费者对大米偏好的驱动因素。

针对在粮食收购环节，部分不法分子通过弄虚作假，将外观相近的非香米掺杂到香米中销售以牟取暴利，甚至于添加香精人为制造“香米”。目前咀嚼法和KOH法是传统鉴别香米最为常用的方法，但是上述方法依赖于感官评定，对于人为向米中添加香精的判别存在准确性较差的问题，更难以实现香米的定量检测。2-乙酰基-1-吡咯啉(2-AP)已被广泛报道为香米爆米花般香气的主要贡献者。国内外多项研究证实，水稻8号染色体上的fgr基因控制其香味，fgr基因缺失的碱基导致截短BADH2蛋白产生，促进2-AP生成。研究针对第7外显子的碱基缺失位点设计特异性引物，利用荧光定量PCR基因技术，可以实现基因层面的香米判别研究。

从检测米香基因的角度，提供了一种高精度真伪香米定性及定量技术，可以针对目前市场上主要的高值香米类型，如稻花香和泰国茉莉香米等典型香米，开展实际商品采样检测工作，解决鉴别香米时存在的准确率偏低的问题，实现了对香米快速、准确地定性鉴定，在其掺伪识别方面具有重要的应用价值。

发明内容

针对在粮食收购环节，部分不法分子通过弄虚作假，将外观相近的非香米掺杂到香米中销售以牟取暴利，甚至于添加香精人为制造“香米”的问题，从控制米香的优质基因角度出发，本发明第一个目的是提供一种香米定性和定量的检测引物组；

本发明的第二个目的是提供含有前述引物组的试剂盒；

本发明的第三个目的是提供一种香米定性和定量的检测方法。

本发明解决其技术问题采用的技术方案是：

第一方面，本发明请求一种香米定性和定量的检测引物组，所述引物组选自如下三对引物中的一种或多种；

内参引物：

(01)ATGTCCATGCTGCAAGCAATGT，如SEQ ID NO:1所示；

(02)GCACACCTGAAGGAAGACCAAC，如SEQ ID NO:2所示；

通用引物(正向)：

(03)ATCACACCCTGGTGTAGAC，如SEQ ID NO:3所示；

香米引物(反向)：

(04)CCATAGGAGCAGCTGAAATATA，如SEQ ID NO:4所示；

非香米引物(反向)：

(05)AGCAGCTGAAGCCATAATC，如SEQ ID NO:5所示。