[发明专利]一种以人复制缺陷腺病毒为载体的尼帕病毒病疫苗

说明书

本发明提供了一种编码尼帕病毒G蛋白胞外结构域的多核苷酸，含有所述多核苷酸的重组人5型腺病毒，以及所述重组人5型腺病毒在制备预防尼帕病毒病疫苗中的应用，本发明提供的疫苗具有良好的免疫原性，能有效且快速的激发BALB/c小鼠的体液和细胞免疫反应。

技术领域

本发明公开了一种腺病毒载体疫苗，属于核酸及医药技术领域。

背景技术

尼帕病毒（Nipah virus，NiV）是一种单股负链 RNA 病毒，为人畜共患病毒。亨德拉病毒与尼帕病毒同属于副黏病毒科亨尼帕病毒属，为生物安全 4 级病原体(BSL-4)。尼帕病毒的自然宿主是狐蝠科的果蝠，这种果蝠地理分布十分广泛。

尼帕病毒能引起人类呼吸道和神经系统疾病，具有高致病性以及较高的致死率。尼帕病毒已被证实可以在人际间传播，因此具有大流行的潜力。

尼帕病毒病被WHO在2018年列为重点关注的10种潜在高危传染病之一，迄今为止仍未有获批许可上市的人用疫苗或治疗药物。尼帕病毒通过其附着(G)和融合(F)糖蛋白结合并进入宿主细胞。其G糖蛋白识别并结合宿主细胞表面受体ephrin-B2 (EFNB)和ephrin-B3 (EFNB3)，进而触发F蛋白的构象级联反应，导致膜融合。因此，针对尼帕病毒的免疫策略主要涉及其G和F蛋白。目前有多种疫苗正在研发中，其中包括病毒载体疫苗、蛋白质亚单位疫苗、病毒样颗粒以及mRNA疫苗等，目前还未有疫苗获批上市。本发明的目的就是提供一种预防尼帕病毒病的疫苗。

发明内容

基于上述目的，本发明首先提供了一种编码尼帕病毒G蛋白胞外结构域的多核苷酸分子，所述多核苷酸分子的序列如SEQ ID NO.1所示。多核苷酸分的序列是基于尼帕病毒G蛋白胞外结构域野生序列（Genbank：AY988601.1）通过人工优化获得的，相较于野生序列，优化前密码子适应指数（CAI）为0.72，优化后CAI达到0.99，同时加入了分泌表达信号肽，从而提高其在哺乳动物细胞中的表达水平。

其次，本发明提供了含有上述多核苷酸的重组人5型腺病毒，所述重组人5型腺病毒表达所述多核苷酸分子编码的尼帕病毒G蛋白胞外结构域。

在一个优选的实施方案中，所述重组人5型腺病毒为重组人5型复制缺陷型腺病毒。

在一个更为优选的实施方案中，所述重组人5型腺病毒为E1、E3联合缺失的人5型复制缺陷型腺病毒。在本发明中，以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺病毒E1基因的HEK293细胞为包装细胞系，将序列如SEQ ID NO.1所示的多核苷酸分子包装可获得重组的人5型腺病毒载体。

第三，本发明提供了上述的重组人5型腺病毒在制备预防尼帕病毒病疫苗中的应用。

在一个优选的实施方案中，，所述重组人5型腺病毒被制备为注射剂、滴鼻剂、喷雾剂或吸入剂。

第四、本发明提供了一种含有上述多核苷酸的穿梭质粒载体。应用所述的穿梭质粒载体可以与相应的骨架质粒共转宿主细胞，包装为重组腺病毒。在本发明的一个具体实施方案中，所述穿梭质粒载体为pShuttle-G质粒(购自于ABM生物科技（中国）有限公司)。

最后，本发明提供了一种制备上述的重组人5型腺病毒的制备方法，所述方法包含以下步骤：

（1）构建包含上述的编码尼帕病毒的序列如SEQ ID NO.1所示的多核苷酸分子的穿梭质粒载体；

（2）将步骤（1）所述穿梭载体与骨架质粒共转宿主细胞，包装重组复制缺陷型腺病毒；

（3）培养步骤（2）所述宿主细胞；

（4）从步骤（3）所述宿主细胞中提取可表达尼帕病毒G蛋白的人复制缺陷重组病毒。

在一个优选的实施方案中，步骤（2）所述宿主细胞为HEK293细胞。