[发明专利]一种制备右旋糖酐蔗糖酶的方法

说明书

本发明公开了一种制备右旋糖酐蔗糖酶的方法：包括以下步骤：将活化的肠膜状明串珠菌体接种至发酵培养基中，培养10‑15h后向发酵培养基中添加裂褶多糖，所述裂褶多糖在培养基中的浓度为1‑5mmoL/L，继续培养20‑25h，结束发酵培养，离心后取上清液，经超滤后得到右旋糖酐蔗糖酶液。本发明提供的制备右旋糖酐蔗糖酶的方法，先在发酵培养基中将肠膜状明串珠菌发酵培养一段时间，然后加入裂褶多糖，继续发酵培养，添加的裂褶多糖可以提高最终发酵液中游离右旋糖酐蔗糖酶的含量和酶活力，提高右旋糖酐蔗糖酶的产量，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，尤其涉及一种制备右旋糖酐蔗糖酶的方法。

背景技术

右旋糖酐蔗糖酶又名葡萄糖基转移酶(Glucosyltransferase)和葡聚糖蔗糖酶(Glucansucrases)，属于糖苷水解酶，它能够以蔗糖为底物合成不同结构的右旋糖酐。右旋糖酐蔗糖酶可用于医药、食品等领域，如防治龋齿、酶解高分子右旋糖酐制备血浆代用品等。该酶多由肠膜状明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)和链球菌(Streptococcussp.)及乳酸杆菌(Lactobacillus sp.)产生。

右旋糖酐蔗糖酶目前主要用来制备右旋糖酐，右旋糖酐能改善微循环，消除血管内红细胞聚集，防止血栓形成及渗透利尿的作用，可用于治疗急性失血性休克、心肌梗塞、脑血栓、脑供不足、周围血管病及防止弥散性血管内凝血和肾功能衰竭等功效，广泛应用于医药、食品、化工等行业。利用固定化右旋糖酐蔗糖酶可以合成一些功能性低聚糖，这些糖常作为益生元广泛应用于食品行业。

目前制备右旋糖酐蔗糖酶主要利用肠膜状明串珠菌(Leuconostocmesenteroides)发酵得到。因为培养肠膜状明串珠菌的碳源与右旋糖酐蔗糖酶反应的底物为同一种物质即蔗糖，导致在培养过程中随着右旋糖酐蔗糖酶的出现也生成了右旋糖酐，右旋糖酐与酶缠绕在一起很难分离，导致发酵液的粘度较大，难以获得游离酶，影响酶活性，因此，如何获得活性较高的右旋糖酐蔗糖酶是本领域亟需解决的问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种制备右旋糖酐蔗糖酶的方法，在肠膜状明串珠菌发酵过程中添加裂褶多糖，制备的右旋糖酐蔗糖酶活力高。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种制备右旋糖酐蔗糖酶的方法：包括以下步骤：将活化的肠膜状明串珠菌体接种至发酵培养基中，培养10-15h后向发酵培养基中添加裂褶多糖，所述裂褶多糖在培养基中的浓度为1-5mmoL/L，继续培养20-25h，结束发酵培养，离心后取上清液，经超滤后得到右旋糖酐蔗糖酶液。

优选的，所述裂褶多糖的平均分子量为10-50KD。

优选的，所述发酵培养基的成分为：蔗糖5-10％、牛肉膏0.02-0.04％、磷酸氢二钠0.1-0.3％、磷酸氢二钾0.1-0.3％、硫酸镁0.05-0.1％、余量为水。

优选的，所述肠膜状明串珠菌为肠膜状明串珠菌Lm-1226。

优选的，所述肠膜状明串珠菌体的体积为所述发酵培养基的2-5％。

优选的，所述发酵培养基的pH为7.5-8.0。

优选的，发酵培养温度为：25-30℃。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明提供一种制备右旋糖酐蔗糖酶的方法，先在发酵培养基中将肠膜状明串珠菌发酵培养一段时间，然后加入裂褶多糖，继续发酵培养，添加的裂褶多糖可以提高最终发酵液中游离右旋糖酐蔗糖酶的含量和酶活力，提高右旋糖酐蔗糖酶的产量，降低生产成本。

具体实施方式

下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。