[发明专利]用于敲除T细胞中的TRAC和B2M的试剂和方法在审
| 申请号： | 202310869844.9 | 申请日： | 2023-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN116622712A | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 鲁薪安;何霆;齐菲菲;刘光华;许文平;王天星;胡雪莲 | 申请（专利权）人： | 北京艺妙神州医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N5/0783;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00;A61P35/02;A61P37/02 |
| 代理公司： | 北京北翔知识产权代理有限公司 11285 | 代理人： | 张拥;张广育 |
| 地址： | 100195 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 细胞 中的 trac b2m 试剂 方法 | ||
1.一种sgRNA套组，其包含：
核苷酸序列如序列3、6、9、12、14、15、16、18和19任一所示的靶向
核苷酸序列如序列37和41任一所示的靶向
2.如权利要求1所述的sgRNA套组，其包含：
核苷酸序列如序列14所示的靶向
核苷酸序列如序列14所示的靶向
核苷酸序列如序列18所示的靶向
核苷酸序列如序列18所示的靶向
3.一种生成TRAC/B2M双阴性T细胞的方法，其包括：使用如权利要求1或2所述的sgRNA套组处理T细胞，使得其中的
4.如权利要求3所述的方法，其中使用sgRNA套组处理T细胞通过电转Cas9蛋白和所述sgRNA套组所形成的复合物来进行。
5.如权利要求3所述的方法，其中在每100μL电转体系中，sgRNA用量为每种80~288pmol，Cas9蛋白用量为160~320pmol，T细胞用量为5.0E+06~2.0E+07个。
6.如权利要求5所述的方法，其中在每100μL电转体系中，sgRNA用量为每种160pmol，Cas9蛋白用量为62.4pmol，T细胞用量为5.0E+06、7.5E+06、1.0E+07或2.0E+07个。
7.如权利要求3所述的方法，其进一步包括：在用sgRNA套组处理T细胞之后，分选和/或扩充TRAC/B2M双阴性细胞。
8.如权利要求3所述的方法，其进一步包括：在用sgRNA套组处理T细胞之后，在分选TRAC/B2M双阴性细胞之后扩充TRAC/B2M双阴性细胞。
9.如权利要求3所述的方法，其进一步包括：在用sgRNA套组处理T细胞之前，使用编码CAR多肽的核酸处理T细胞，使得CAR多肽在T细胞表面表达。
10.如权利要求3所述的方法，其进一步包括：在用sgRNA套组处理T细胞之后，使用编码CAR多肽的核酸处理T细胞，使得CAR多肽在T细胞表面表达。
11.如权利要求9或10所述的方法，其中使用编码CAR多肽的核酸处理T细胞通过慢病毒感染来进行。
12.如权利要求9或10所述的方法，其中所述CAR靶向CD19、IL-13Ra2、或BCMA。
13.如权利要求12所述的方法，其中靶向CD19的CAR由序列42编码，靶向IL-13Ra2的CAR由序列43编码，靶向BCMA的CAR由序列44编码。
14.通过如权利要求3-8任一项所述的方法获得的TRAC/B2M双阴性T细胞。
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