[发明专利]一种用于核酸检测的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于核酸检测的试剂盒，该试剂盒包括免疫层析试纸和扩增目标核酸的反应体系。免疫层析试纸按样品流动方向依次包括含有胶体金标记抗体的样品垫、含有T线和C线的NC膜及吸水滤纸；样品垫包被有链霉亲和素蛋白标记的胶体金颗粒；T线由抗地高辛抗体或荧光标记相应抗体形成；C线由链霉亲和素抗体形成。核酸反应体系包括用于扩增目标核酸的反应引物、探针及样本稀释液。本方法可用于PCR核酸检测体系或等温扩增体系，或CRISPR的检测，有简便、快速、便携、可实现现场检测及无需专业操作人员等优点，实现了核酸的快速定性检测。

技术领域

本发明属于分子诊断领域，尤其涉及一种用于核酸检测的试剂盒。

背景技术

目前适用于CRISPR核酸检测的 LFCA（lateral flow chromatographic assay ）试纸主要采用“三明治夹心法”，具体的原理为在报告分子两端连有发光基团（FAM）和生物素（Biotin），样品滴在样品垫上，样品经毛细作用向吸水纸一侧流动，先经过C线，后经过T线。在流动过程中，报告分子与anti-FAM金纳米颗粒结合，若不存在底物则切割反应不发生，报告分子-金纳米颗粒被链霉素亲和素捕捉，形成第一条条带；若存在底物则切割反应启动，金纳米颗粒会被抗体捕捉而无法被链霉素亲和素捕捉，形成第二条条带即检测T线，如图1所示。

该方法在侧流层析卡制备过程中为实现C线的拦截，会采用降低划线浓度以及降低金标抗体浓度的方式，来使得截留效果更好，但这样做的结果会造成阳性率不足，假阴性率较高的情况出现；另一方面，与传统胶体金检测卡中C线对于反应的有效性把控不同，此方法中当阳性强度较高时，可能会出现C线消线的情况，即阴性、阳性都有可能出现单一条带的情况，可能会造成无效结果的误判以及判读难度较高，为解决这一技术问题，发明专利公开号CN 111621598 A公开了一种消线法制备免疫层析试纸的方法，即通过结合CRISPR核酸检测系统实现对多种特定核酸(病原、基因突变、耐药突变等)的检测，但该方法以T线消线判读阳性，无法满足高灵敏度的需求，且以链霉亲和素作为包被原捕获探针标记生物素特异性比抗原抗体间的特异性反应略有不足。由于该方法灵敏度不足，不能满足常规PCR项目的检测。因此，为提高阳性结果的检出率，提高结果的有效性判读，需寻找更合适的检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于核酸检测的试剂盒。

为实现以上技术目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于核酸检测的试剂盒，所述试剂盒包括用于核酸检测的免疫层析试纸；

所述免疫层析试纸按样品流动方向依次包括含有胶体金标记抗体的样品垫、含有T线和C线的NC膜及吸水滤纸；

所述样品垫包被有链霉亲和素蛋白标记的胶体金颗粒；

所述T线由抗地高辛抗体或其他标记用荧光素相应抗体形成；

所述C线由链霉亲和素抗体形成。

进一步的，所述试剂盒还包括核酸检测的反应体系；所述反应体系包括用于扩增目标核酸的反应引物、探针及样本稀释液。

进一步的，所述反应体系用于核酸扩增体系或核酸CRISPR体系中的任意一种。

进一步的，所述核酸扩增体系的探针两侧标记的标记物包括生物素或荧光素或地高辛中的任意一种。

进一步的，所述样本稀释液为带有磷酸盐、吐温-20、Tris-HCl的缓冲溶液。

进一步的，所述的核酸扩增反应体系包括PCR扩增体系和等温扩增体系。

本方案采用生物素与地高辛或荧光素为标记物，标记在检测探针的两端，本方法参考胶体金竞争法检测原理制备胶体金检测卡，以抗地高辛抗体作为检测线（T线）包被在硝酸纤维素膜上，以链霉亲和素抗体作为质控线（C线）包被在硝酸纤维素膜上；采用胶体金标记链霉亲和素，结合探针一端的标记物生物素，当结合的探针-金标蛋白复合物层析到质控线时，可被C线包被的链霉亲和素抗体截留，金粒子富集显色。