[发明专利]从性成熟鱼中获取适于受精的性产物的方法

说明书

本发明叙述在与鱼的自然产卵季节无关的期间内，从性成熟鱼中获取适于受精的性产物的方法。

我们知道，雌鱼和雄鱼的性活动由鱼的腺垂体释放出的促性腺激素调节。这类激素制约性腺的形态和功能的形成，性腺的成熟，以及性腺的配子发生活性（卵子和精子的产生）（性腺）和性腺激素的分泌。

在两种性别的个体中，腺垂体均释放出同样两种促性腺激素。其中之一称为FSH（促卵泡激素）。另一个称为LH（促黄体激素），或者根据其在雄体中的作用称为ICSH（促间质细胞激素）。

我们还知道，这两种激素并不显示对性别的特异性，因为同样的FSH对雄体和雌体中产生配子的活性都有影响，并且同样的LH或ICSH都将诱导雄体中雄激素的分泌及雌体中雌激素或孕酮的分泌。

FSH和LH均为糖蛋白，它们对鱼类显示很强的种属特异性。

鱼的（脑）垂体使鱼的内分泌系统许多功能完整化，该（脑）垂体在内分泌系统与神经系统之间也具有某些协调功能，这主要通过间脑的丘脑下部区域中自主神经系统的核团来实现。此外，（脑）垂体在具有种属特异性促激素的协助下调节生殖周期。

在正常条件下，鱼的排卵发生在某种鱼所特有的产卵环境之中。成熟的卵并不自动进行排卵，它们仍处在或长或短的潜伏期内，直至适当的条件形成。鱼的这种生殖适应特性是由鱼的脑垂体和中枢神经系统联合控制。在潜伏期内，鱼的机体处于平衡状态，释放促性腺激素的能力非常低，因此，仅有很少量的促性腺激素在这时被释放到血液。测定鱼的最佳产卵条件的准确时间是不可能的，因为产卵条件的形成在某段期间内（如晚春或初夏）或多或少具有偶然性，这就意味着鱼类繁殖的调节机制使其生殖周期可以适应外界环境。鱼体内的这种调节由鱼的丘脑下部一脑垂体系统协调。

根据最近几年的研究，人们已经认识到，神经激素调节腺垂体中某些促激素的释放。神经激素从末梢神经出来，传到丘脑下部的某些核团处，立即被所谓的门脉毛细管吸收。由此，这些神经激素通过血液直接到达腺垂体窦处。

就目前为止所知的神经激素均为寡肽或多肽。诱导促激素分泌的神经激素称为“释放因子”（RF），而抑制促激素分泌的神经激素称为“抑制因子”（IF）。根据最近的命名法，对于已知其结构和功能的神经激素，使用“释放激素”（RH）或“释放抑制激素”（RIH）这类术语。

所有神经激素都有这样的特征，即它们在去垂体动物体内的作用类似于在加入促激素之后观察到的作用。

鱼垂体的嗜碱细胞呈季节性变化，其数量在产卵期间减少。在对环境的适应过程中，产生了释放激素（RH），这些激素通过血液流入脑垂体，调节其中促激素释放到血液。由此，鱼得到存在合适的外界产卵条件的信息。结果，促黄体素释放激素（LH-RH）（促黄体激素调节激素）激活脑垂体，并使其向血液中释放促性腺激素，从而开始产孵过程[布雷顿B和韦尔cl，巴黎，科学院报（C.R.Acad.Sc.，Paris），1973年277期，2061～2064页]。

由在产卵处所产生的感觉神经冲动以这种方式传递到内分泌系统，该机制活化了一直处于强制潜伏期的生殖系统。根据子代生存的观点，此时能够 检测出最佳外界环境（格比尔斯基，同上述）。

神经激素具有高度种间特性。鱼体内促黄体激素和释放激素的顺序不同于哺乳动物。因此，当两种激素互换时，没有效能。人工诱导繁殖已经成为可能（格比尔斯基，同上述）。

为了用激素诱导产卵而从成熟或接近成熟的普通鲤科鱼中收集的脑垂体，经过适当的保存之后，已被普遍使用。迄今所试用的其它天然或合成的激素则尚无一致的实验结果。

这种普通鲤科鱼普遍养殖，全世界各地蕴藏量很大。因此能够轻而易举地收集到足够量的脑垂体，以满足生产目的。普通鲤科鱼的脑垂体也可以成功地用于繁殖其他几种养殖的鱼。分类上远缘的鱼种（如鲟）属于例外。对这类鱼则使用由其同种的脑垂体而制备的激素悬浮液。

脑垂体的收集和保存均用同样的方法，与其供体种类无关。脑垂体应该从较成熟的的（尽可能是性成熟的）鱼中收集，但这种可能性非常小。脑垂体在小鱼体内更小，因为使用时以重量计，所以从小鱼身上收集脑垂体时需要大量的供体鱼。

根据已知方法，垂体用丙酮干燥。在丙酮中浸泡3次，每次8至12小时之后，垂体脱去水和脂肪。硬化以后，脑垂体在室温下干燥24小时，同时丙酮被蒸发出来。丙酮无损于垂体的促性腺活性成分。以上述方式干燥的垂体能贮存较长的时间而没有损失。

为了活化促性腺激素，将腺体在瓷研钵中磨碎，激素溶解在鱼的生理盐水溶液中（含0.65%NaCl）。