[其他]鱼类细胞光隆培养技术

说明书

本发明属于A01K，鱼类、鱼类细胞工程。

本发明在国内外尚无先例，至今未有见到鱼类细胞的克隆化培养·文件检索可见：

江藤久美    1978·遗·32（7）：64-71。

本发明的目的在于培养鱼类细胞克隆，研究鱼类的细胞形态、细胞的生化特性、细胞遗传、细胞一病毒关系、突变体分离，促进鱼类细胞工程和单克隆抗体技术的发展。

鱼类细胞克隆培养技术包括三个步骤：

1.制备饲养细胞：取罗非鱼的肾组织，经冷消化后，按100万个细胞/毫升接种，培养原代单层细胞，作饲养细胞用。

2.分离克隆：将待克隆的鱼类细胞传代，挑选形态整齐、色泽明亮、胞质内颗粒少的生长良好的细胞，用细胞显微操作法将单个细胞移入预先加有0.1毫升饲养细胞（约含1.5-2.0万个细胞）的96孔微量培养板中，加盖，透明胶带密封，27℃孵箱培养。

3.复制培养：当细胞在接种的96孔微量培养板中长至大半孔时，即可消化成细胞悬液后，利用复制培养技术，进行转移扩增，可获得大量细胞克隆。

本技术对鱼类细胞的克隆率为50%以上，最高能达92%，而用哺乳类细胞克隆方法分离鱼类细胞克隆，其克隆率为30%。因此，本技术具有克隆率较高，培养时间较短，不需经X射线处理饲养细胞，使用方便等优点，能在短期内获得大量细胞克隆。

用细胞显微操作法分离待克隆的单个细胞，以罗非鱼肾培养单层细胞作饲养细胞，与复制培养相结合进行转移扩增的技术，是实现本专利的最好方式。