[发明专利]制备活的纯化的MAREK氏病疫苗的方法

说明书

MAREK氏病是一种由鸟泡疹病毒，MAREK病病毒感染而引起的鸡的恶性淋巴增殖疾病。此病毒是于1907年识别出来的，现在它仍然是家禽病毒中危害性最大的一种。

本发明涉及制备由MAREK氏病病毒（MDV）株CVI-988分化的一种高免疫原性和非致性病毒制剂，特别是一种抗Marek氏病疫苗的方法。此方法的特点是利用属于鸟泡疹病毒血清型-1的Marek氏病毒（MDV），该克隆接种可以保护用其接种的鸡免以后的强毒力和极强毒力的MAREK氏病（MD）病毒变种感染。该克隆是通过属于鸟类泡疹病毒的Marek氏病病毒的传代和噬斑纯化而得到的。用作传代和噬斑纯化起始材料的病毒是具MDV    CVI-988特性的病毒，该病毒株是作为通过在细胞培养物中经系列传代使病毒减弱的低毒培养物从健康的实试室用鸡身上得到的。（Rispens等人in    Avian    Diseases    16，108-125页，126-138页，1972年）。在鸟类细胞培养约35代后得到的病毒制剂成功用作制造抗Marek氏病（MD）的鸡的疫苗。开始病毒性减弱是在鸭胚成纤维细胞（DEF）中进行。然而在无特殊病原体（SPF）感染条件下，鸭很难存在。这就需要对每批产品进行广泛的试验，以保证其没有对鸟类有致病性的微生物，在SPF条件下，鸡的存养问题较少。再者，因为它们不能将MD疫苗引入与之无关的动物种属的细胞内，故一般选用鸡细胞。因此，在1967-1968年间，即已将MDV    CVI-988病毒株在鸡胚成纤维细胞（CEF）中培养，且MDV    CVI-988疫苗的制造者们亦已转向在CEF中生产该疫苗。

虽然在实践中，由亲代病毒株MDV    CVI-988制取的疫苗已通过肌肉内给药提供了十分满意的结果（MAAS    et    al，World    poultry    Sei，38，163-176页1982年）当用十倍于正常范围的剂量接种时，在高MD敏感性的SPF种的罗得岛红鸡（RHODE    ISLAND    RED，RIR）身上，也可能引起MD损害（AV1AN    PATHOLOGY    6，395-403，1977年）。

其它所用的抗MAREK氏病疫苗有：

1.一种基于属于鸟类泡疹病毒血清型3的火鸡泡疹病毒（HVTFC126），（Avian    Diseases    14，P413-429，1970年）和美国专利（3，642，574）号专利。美国3，783，098号专利叙述了以无细胞形式使用这种疫苗的方法。

2.一种由强致病性的MDV病毒株（HPRS-16）经减毒得到的疫苗，所用病毒株属于鸟泡疹病毒血清型1（Journal    of    Geggnal    Vizology    4，P557-564，1969年）和美国专利（3，674，861号）。

3.一种基于血清型2（SB-1）的MAREK氏病病毒的非致癌性病毒而制得的疫苗（Journal    National    Cancer    Institute    60，P1075-1082，1978年），和美国专利（4，160，024号）。这种疫苗一般作为HVT疫苗的混合物使用是有效的。

本发明提供了一种病毒制剂，特别是一种疫苗，对于家禽，特别是对于鸡具有高度免疫厚性并且是非致病性的。

本发明的病毒制剂是用于属于鸟类泡疹病毒血清型-1的克隆制备的，用这种克隆接种可以使鸡免受以后的强毒力和极强毒力MAREK氏病（MD）病毒变种的感染。

根据本发明，这种克隆是通过属于鸟类泡疹病毒血清型-1的Marek氏病病毒在鸟类细胞培养中传代和噬斑纯化，再选择免疫原性和非致病性，特别是对MD-高敏感的罗得岛红鸡免疫原性和非致病的克隆。优选的作为起始材料的Marek氏病病毒是MDV    CVI-988。优选的克隆是通过在鸭胚成纤维细胞（DEF）中病毒分离株MDV    CVI-988的系列传代及在DEP的三十九及四十九代之间经六个噬斑纯化步骤得到的。这个被称作MDV    CVI-988克隆C的病毒克隆，因其对RIR鸡有抗原性且是非致病的而得以被筛选。