[发明专利]裂褶菌的培养工艺及其利用

说明书

本发明属于担子菌类的培育及利用技术领域。

本发明所述担子菌类中的一种裂褶菌拉丁文学名SchizophyllumCommuneFr。南大843菌株1985年5月16日保藏于北京中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCCNO.0012。

在已有技术中，中国科学院微生物研究所用做纯种保藏的裂褶菌菌株，其母种培养介质是马铃薯、葡萄糖、琼脂或麦芽汁琼脂，最适温度24°-26℃，尚未应用于工业生产。国外日本“TheJapaneseJournalAntiobics”Vol.23（2）：157-160页中报导。裂褶菌培养采用合成培养介质，即用化学成份已知的有机物或无机物配制培养介质，其成本高，菌丝体得率低（培养5天1升发酵液含1-5g菌丝体），多糖得率亦低。（培养5天1升发酵液含0.2-1g多糖）。

本发明的目的是用黄豆粉等做培养介质培养裂褶菌，提高菌丝体及裂褶多糖的得率，并从裂褶菌中提取抗肿瘤、抗放升白及调整机体免疫功能、生产抗菌素增效剂的裂褶多糖和人体必需的氨基酸。

本发明的技术方案是裂褶菌从腐木上经组织分离获得纯菌株南大843，将其接种在PDA或麦芽汁固体斜面培养基上，温度24℃，生长7-10天，然后转管纯化，放入0°-2℃的冰箱中保存备用。液体发酵培养用天然黄豆粉等配制培养介质，其成份和配比是，1000ml培养介质含天然黄豆粉5-10g，葡萄糖或庶糖30-40g，酵母膏2g，硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾1g。培养介质还可用盐酸硫胺素做添加剂，每1000ml培养介质可增加0.01-10mg。250ml摇瓶装75-150ml培养介质，500ml摇瓶装150-250ml培养介质，采用往复式摇床，振荡速度80-130次/分，或旋转式摇床，振荡速度100-200转/分，培养温度24℃-26℃。在菌丝大量生长时，菌液由深变浅，由混浊逐渐变清。随着培养时间的延长，发酵液中还原糖、氨态氮、pH都逐渐降低，菌丝体重量不断增加，至第6天多糖含量最高，还原糖降到1%以下，氨态氮降到15%，pH下降到4.6-4.8，菌球的体积占发酵液总体积70%，此时可终止发酵，发酵周期为五天。

固体发酵培养用70-78%（重量）的甘庶渣（或木屑、山芋渣、棉子壳）、1%（重量）的庶糖或葡萄糖、20-28%（重量）的麸皮或米糠、1%（重量）的石膏或碳酸钙，加水拌匀、pH自然，装入菇瓶，在1.5kg/m²的压力下消毒1-2小时，冷却后，在无菌操作下试管斜面母种接种于菇瓶内，一管母种接种1-3瓶，培养温度22-26℃，20-30天菌丝体布满全瓶即可采收。

裂褶菌在液体发酵培养工艺下生长，每升发酵菌液中含3-5g裂褶多糖（Schizophyllan）（干重），含200-300g菌丝体（湿重）;每100g菌丝体（湿重）含0.8-1g多糖，发酵液和菌丝体中氨基酸含量如下：

氨基酸名称100ml发酵液中100g菌丝体中氨

氨基酸含量基酸含量（g）

（mg/ml）2.33

天门冬氨酸 8.99 1.22

苏氨酸 3.94 1.29

丝氨酸 2.62 3.82

谷氨酸 11.0 1.13

甘氨酸 2.72 1.65

丙氨酸 2.07 0.238

胱氨酸 1.26 1.37

缬氨酸 4.59 0.396

蛋氨酸 0.22 2.35

异亮氨酸 4.02 1.98

亮氨酸 6.01 0.886

酪氨酸 2.40 1.01

苯氨酸 2.50 1.70

赖氨酸 2.56 0.628

组氨酸 1.19 2.08

精氨酸 2.08 2.45

脯氨酸 2.45

从上述工艺培养出的裂褶菌提取的裂褶多糖，可用于临床抗肿瘤、抗放升白、抗炎、降低抗菌素付作用，生产抗菌素增效剂，提高抗菌素效价，提取的氨基酸可用作调味品和儿童食品强化剂。