[其他]酶法解离紫菜营养细胞育苗方法无效

专利信息
申请号: 85104059 申请日: 1985-05-26
公开(公告)号: CN85104059A 公开(公告)日: 1986-11-26
发明(设计)人: 方宗熙;戴继勋;唐延林;刘万顺;包振民 申请(专利权)人: 山东海洋学院
主分类号: A01G33/02 分类号: A01G33/02;C12N9/00
代理公司: 山东海洋学院专利代理事务所 代理人: 王秋
地址: 山东省青岛*** 国省代码: 山东;37
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摘要:
搜索关键词: 解离 紫菜 营养 细胞 育苗 方法
【说明书】:

内容:本发明属于经济海藻育苗技术。

在已有的技术中,公知的紫菜人工育苗方法是,果孢子采集、丝状体培育和壳孢子采苗三个步骤〔註1〕,这一采苗方法,仅丝状体培育就需要5~6个月,需要专用的育苗室和培养设备,丝状体培养中时有病害发生,壳孢子释放易受环境条件的制约,育苗技术难度大,不易掌握,成本高。高产的坛紫菜在北方壳孢子采苗困难而不能推广养殖。

为了克服已有的紫菜有性生殖育苗技术上的缺点,提高紫菜育苗技术和紫菜养殖的经济效益,根据酶法可以解离紫菜叶状体营养细胞再生植株的原理〔註2〕,设计了紫菜无性繁殖的营养细胞育苗方法。

本发明的构思是,从食藻性海螺的软体部分制备含有多种消化酶的复合酶,并加入葡萄糖或蔗糖配成营养细胞解离液,将冷藏保存在-20℃的紫菜叶状体,剪碎放入解离液中,在25~30℃下使营养细胞解离。解离后,以清洁海水洗涤单细胞以清除多余的酶和糖,离心收集单细胞。将制备的营养细胞在育苗设备中加营养海水培养10~15天,然后置入采苗器具进行采苗1~2天,然后移至海上养殖。

本发明的最佳实施例是:

1、紫菜营养细胞解离液的制备:

采集新鲜的粒嵘螺在海水中饥饿囚养2~3天,洗涤后将海螺壳破碎,加海螺重量2倍的蒸馏水搅拌提取10分钟,用纱布过滤除去渣滓,过滤液离心(10,000转/分)30分钟。上清液加入盐酸调pH沉淀去杂蛋白,离心(10000转/分)30分钟。上清液加入1.8克分子的葡萄糖配成解离液。(为了长期保持酶的活性,可按文献〔註3〕中所提供的方法制成酶干粉保存。)

2、营养细胞的制备:

置于-20℃的冷冰设备中保存的条斑紫菜叶状体在常温海水中培养2天,切成小块,放置于细胞解离液中25℃保温3小时,然后用300目筛绢过滤,滤液在10000转/分下离心3分钟。沉淀下来的细胞用海水洗涤三次,每次洗涤后,用同样离心方法去除洗涤液,收集单细胞。

3、单细胞培养及采苗:

将解离制备的单细胞置入育苗设备中,加入加营养盐海水含氮8ppm,磷1ppm,以及二价铁离子1ppm,光照培养(光强2000Lux左右)。温度16~22℃,培养14天后,便有大量可供采苗的孢子放散,放入采苗器具,充气采苗36小时后,移至海上养殖。

〔註1〕:中国科学院海洋研究所藻类实验生态组、藻类分类组,1978,条斑紫菜的人工养殖,科学出版社。

〔註2〕:唐延林,1982,紫菜营养细胞和原生质体的分离和培养,山东海洋学院学报,第12卷第4期,37~50。

〔註3〕:刘万顺,唐延林,刘学武,方宗熙,1983,海螺酶制备和性质的研究,第11届国际海藻学术讨论会论文集,319~320。

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