[其他]奶牛控性生母方法

说明书

本发明属于奶牛繁殖技术的一种方法。

在奶牛繁殖技术中，均推行冷冻精液和人工授精方法，精液冷冻时只按一定比例加入冷冻保护液平衡后即滴冻颗粒，人工授精时使用的解冻液其pH为7.0左右，这对精液中含X染色体和含y染色体两种类型精子，均有很好保护作用，所以其后代性别比例接近1∶1，实际上往往是生公牛略多于生母牛，这在经济上是不合算的，而奶牛生产者希望多生母牛，因为母牛通常比公牛值钱。为增加多生母牛的机会，获取更大的经济效益，人们渴望有一种有效的方法，在奶牛繁殖时能控制胚胎性别，使其多生母牛。目前，虽然研究探索一些性别选择方法，但多停留在实验研究阶段，真正在奶牛生产中应用，还没有可行的方法。

本发明的目的是要提供一种在奶牛繁殖时控制胚胎性别使其多生母牛的方法。

发明是这样实现的：

给奶牛进行人工授精时，先准确进行发情鉴定，判定排卵时间，输精时机掌握在排卵前4小时至排卵后2小时。输精前用输精管探取子宫颈口粘液测其pH，并根据pH大小，确定向子宫内注入酸性缓冲液数量，一般注入40～50毫升，造成利于含X染色体精子存活和受精的环境。向子宫内注入酸性缓冲液后，随时检测子宫颈口pH变化，一般经10～15分钟，当子宫颈口pH达到5.8～6.0时，为最佳输精时间，此时立即输入事先用生母液解冻的常规冷冻精液;或者输入通过精液分离后冷冻的含X染色体精子较多的冷冻精液。解冻后精子活力达到0.25～0.3以上时即可用于输精。在一个情期内只输精一次。采用这种调整奶牛生殖道酸碱度并用生母液解冻精液的方法，当X、y两种类型的精子同处于pH6.0的条件下，含y染色体精子的活性受到抑制，含X染色体精子在弱酸性环境中有较好的活力和受精能力，所以雌性后代比例提高，如使用通过精液分离后冷冻的含X染色体精子较多的冷冻精液，就更充分发挥了含X染色体精子的优势，结果使80%～85%的怀孕牛生母牛。

奶牛常规人工授精一个情期一般输精2次，采用控性生母方法因准确判定排卵时机，一个情期只输精一次，二者受胎率无显著差异，其后代生长发育正常，操作术式，所用器材及成本相差不多，但控性生母方法比常规人工授精生母率提高30%～35%。

含X染色体精子较多的冷冻颗粒是这样制取的：在18～20℃暗室内，将采取的奶牛精液镜检合格后，立即用分离稀释液稀释至25毫升，稀释液温度保持在32～37℃，要比原精液温度低1℃用无菌的100毫升玻璃注射器抽取稀释的25毫升精液，排出气体，堵塞注射器嘴，将注射器水平放置在分离木架正面的托板上，在分离架正面42.5厘米处安装一个300W灯泡为光源，其光源高度为10厘米，将灯泡前端对准注射器装精液部分进行照射，光照40分钟分离结束。试验证明，当操作者和光源同一方向面对注射器并且注射器嘴指向操作者左侧时，则分离后注射器内前 1/2 精液大部分含X染色体精子，后 1/2 精液大部分含y染色体精子。平稳缓慢推出前 1/2 精液，约12毫升，装于集精瓶内。因分离时加入分离稀释液，降低了精液密度，为保证每一输精剂量的有效精子数，需将分离后含X染色体精子较多的精液离心浓缩，每分钟1200转离心5分钟，取出静置5分钟，吸出部分上清弃掉，使每毫升沉淀内精液密度保证在3.5亿以上，再按分离稀释液实际量，以分离稀释液75、卵黄20、甘油5的比例加入卵黄和甘油，按20℃16℃、12℃逐级降温，每次降温15分钟，然后按常规冷冻精液操作规程制做冷冻精液。

所用配方如下：

酸性缓冲液：pH3.0

5%葡萄糖    500毫升

乙    酸（36%）14.5毫升

现用现配。

生母液：  pH6.0

双重蒸馏水    1000毫升

蔗    糖    11.5克

柠檬酸钠    14.0克

磷酸二氢钾    3.3克

氨苯磺胺    3.0克

柠檬酸    1.0克

以柠檬酸增减调pH为6.0。每安瓶分装4毫升，灭菌备用。

分离稀释液：

分析纯蔗糖    12克

双重蒸馏水    100毫升

每100毫升12%蔗糖溶液加青、链霉素各10万单位。

下面是本发明的实施例：

首先对奶牛进行发情鉴定，判定排卵时间，在排卵前4小时至排卵后2小时内输精效果最好。准备输精前，用输精管探取子宫颈口粘液，测其pH大小，当子宫颈口pH在7.2以下时，向子宫注入酸性缓冲液40毫升，注入后10～11分钟即可输精;子宫颈口pH在7.2～7.4时，向子宫注入酸性缓冲液50毫升，注入后15分钟即可输精;子宫颈口pH在7.5以上时，向子宫注入酸性缓冲液50毫升，注入后13分钟即可输精。原则上要掌握向子宫注入酸性缓冲液后需检测子宫颈口pH大小，当其pH达5.8～6.0时为最佳输精时间，上述注入酸性缓冲液后经10～15分钟输精，是根据试验证明此时子宫颈口pH刚好达到5.8～6.0，这是一般规律。初做者，试验5头牛即可确定注入酸性缓冲液后子宫颈口达到5.8～6.0所需的时间。注入酸性缓冲液后，在予定输精前4～5分钟用2毫升生母液将2粒常规冷冻精液解冻，或者用2毫升生母液将2粒通过精液分离后冷冻的含X染色体精子较多的冷冻精液解冻，解冻后精子活力达到0.25～0.30以上时即可用于输精。在输精前1分钟将装精液的输精管送达输精部位，等到输精时间立即输精。在一个情期内只输精一次。在向子宫注入酸性缓冲液时，可用细胶管接钟头柄连接注射器和输精管，即可缓慢顺利注入。按上法操作，可使怀孕奶牛生母率达到80%～85%。