[其他]生产有用物质的方法

说明书

本发明是关于利用遗传工程技术生产可用作药物的物质的方法，特别是关于较之常规方法更为有效地生产这些物质的方法，尤其是涉及利用病毒DNA于体外和体内生产这类物质的方法。另一方面，本发明涉及利用核多角体病毒，于家蚕〔中国桑蚕（Bombyx    mori）〕体内有效地生产各种有用物质的方法。本发明也涉及到用于实施上述方法的载体和重组体病毒DNA，以及以其生产同样物质的方法。

以前曾报导过许多借助重组DNA技术的优越性，使用载体等在大肠杆菌、枯草杆菌、啤酒酵母等微生物体内生产有用物质的方法。

有一篇报导述及试图利用一种其结构基因被替换后的病毒DNA（Autographa    californica核多角体病毒DNA），在培养的细胞（一种建立的Spodoptera    frugiperda细胞系）内生产β-干扰素和β-半乳糖苷酶〔Molecular    and    Cellular    Biology，3（12），2156-2165（1983）;ibid.，4（3），399-406（1984）〕。但问题在于用来完成该方法的A.Californica病毒是可在外界生存的有害毒株。因此以所说的方法来生产有用物质是不能令人满足的。本发明人进行了一些试图提供一种更好方法的研究，以生产有用物质现已完成了本发明。

本发明提供一种利用中国家蚕核多角体病毒（以下缩写为BmNPV）的DNA，以遗传工程技术生产如蛋白质或糖蛋白等有用物质的方法，特别是提供一种利用所说的BmNPV    DNA中启动子区域的功能优点与有用物质之基因重组而得到的重组体DNA、以及用于这种重组的重组载体，以有效地生产有用物质的方法。本发明还提供一种利用与BmNPV重组转移载体结合方式影响转染的方法，该重组的转移载体含有一个原来存在于多面体蛋白质结构基因之上游，且仍包括所说结构基因之启动子区域的5′上游BmNPV    DNA片段、一个翻译起始密码子以及一个产生有用物的基因，带有或不带有原先存在于所说的多角体蛋白结构基因下游的3′下游BmNPV    DNA片段。本发明进一步提供一种生产有用物质的方法，其包括用重组转移载体和BmNPV    DNA的混合物接种培养的细胞或活的家蚕体以便形成重组体BmNPV，从而在所说的细胞或活体内产生所说的重组BmNPV，或者以同样方法用重组BmNPV接种培养的细胞或活的家蚕-该重组BmNPV是通过由BmNPV    DNA和大肠杆菌质粒如PBR322制备一个连接的DNA，再用其它的适当方法进一步用生产有用物质的基因取代多面体蛋白结构基因而构建的，并在所说的细胞或活体内增殖所说的重组体BmNPV。本发明的一个特殊方面是，其所提供的制造有用物质的方法包括在培养的细胞或宿主（特别是由中国家蚕得到的细胞系或恬的家蚕体）内增殖重组的中国家蚕核多角体病毒（BmNPV），该重组体是通过重组含有原先存在于多角体蛋白结构基因上游且仍包括所说的结构基因启动子区域、一个翻译起始密码子和产生有用物质的基因的5′上游BmNPV    DNA片段而产生的，其带有或没有原先存在于所说的多角体蛋白结构基因下游的3′下游BmNPV    DNA片段。另一方面，本发明提供了一种载体，其含有最初存在于所说的多角体蛋白结构基因上游且仍包括所说的结构基因之启动子的5′上游BmNPV    DNA片段，以及一个最初存在于所说之结构基因下游的3′下游BmNPV    DNA片段，另外，刚刚提到的这种载体中的5′上游DNA片段是跟在翻译起始密码子和产生有用物质的基因之后的。再一个方面，本发明提供一种生产有用物质的方法，其包括由BmNPV    DNA上切去多角体蛋白结构基因，连同有自所说的结构基因的且包括所说的结构基因的启动子区域的5′上游部分，以及自所说的结构基因下游的3′下游部分，用产生有用物质的基因去置换所得到的DNA片段的结构基因部分，将置换产物插入载体中，将如此产生的与BmNPV    DNA与BmNPV    DNA联合转移到细胞或宿主中，以便转染并增殖所得到的重组BmNPV    DNA;经与产生有用物质的基因重组而产生的重组BmNPV    DNA为异源基因;刚刚提到的这种重组BmNPV    DNA，其重组是通过在多角体蛋白基因区域置换，或在某些其它区域插入而实现的;一种以遗传工程技术生产有用物质的方法包括利用BmNPV    DNA作载体;而且以遗传工程技术生产有用物质的一种方法包括利用原来存在于多角体蛋白结构基因之上游并仍包括所说的结构基因之启动子区域的5′上游BmNPV    DNA部分、以及原来存在于所说的结构基因之下游的3′下游BmNPV    DNA部分。