[其他]掌状叶大黄的茎尖培养法

说明书

本发明是有关掌状叶大黄（以下说明的掌状叶大黄是日本药典第十次修正此记载的Rheum    palmatum    linne′，Rheum    offic-inale    Baillon，Rheum    tanguticum    Maximowicz    Rheum    coreanum    Nakai，以及介于这些种之间的杂种，但不包括Rheum    undulatum    L.Rheum    rhaponticum    L）的茎尖养法、更确切地说是关于可行的掌状叶大黄的培养增殖的方法。

蓼科大黄属（Rheum）是生长于欧亚大陆各地植物群，根据叶身形状不同而分为圆叶大黄和掌状叶大黄，自花不亲合而多要通过种间杂交，种子的特性是具有仅通过营养繁殖来保持共同的性质。而圆叶大黄是用于果酱等食品，掌状叶大黄则广泛地用作以泻甙（senn-oside）A，B，C，D，蒽醌类、丹宁类等为药效成份的生药。

可是，大黄存在属有1个问题，就是如上所述由于多是种间杂交等原因，所以就不可能大量地以及常年稳定地获得具有一定质量的大黄。因而很早以来采用营养增殖法的方法以及作为这种植物的组织培养法而为公所周知的茎尖培养法等就一直在进行研究。例如沃尔基氏等（D，G、A、Walkey    ＆    K、A、MatheWs）就提出过有关圆叶大黄中的R、rhaponticum    Timpertey    Early的茎尖培养法（Plant    Science    Letters，14，287…290（1979）。沃尔基氏等的方法之特征是;在加有激动素及β吲哚基乙酸的培养基上进行茎尖培养。

然而本发馀人通过对掌状叶大黄施于同样的方法试验，结果发现生长点细胞没有增殖而枯死。一般认为这是由于圆叶大黄和掌状叶大黄种类的不同而对生长激素的要求不同所致。

本发明从上述的观点出发而旨在于提供可行的具有药效成份的掌状叶大黄的培养增殖的方法。

另外，本发明的另一目的就是通过在一定条件下的培养能够通过均一而且理想的育苗，保种而获得稳定的含有一定质量的有效成份的大黄。

达成上述之目的的本发明之茎尖培养法所具有的特征是采用含有有苄腺嘌呤或者是其的核苷（苄腺苷）和萘乙酸或者是β吲哚基乙酸的培养基，来进行新芽的形成和增殖，然后在只含有萘乙酸或者β吲哚基乙酸中任何一种来作为生长激素的培养基上来让其生根。

有关本发明所具有的特征是基于经过反复多种的试验之结果而形成的，以下对此给予详细地说明。

当有在以下的说明里，对于广义的生长激素这个词，主要是作用于形态生长的就称态生长激素，而主要是作用于分化促进的就称分化促进激素，这样来便于使用。这些词虽然可能说能够符合多数研究者的意见，但是本发明人认为在说明本发明时是有效而且是比较合理的用语。

所谓的本发明之茎尖培养法是指适用于无菌取出生长点，培养（新芽形成、增殖、生根）、及幼苗栽培。

无菌取出生长点

大黄的生长点存在于根茎最上部，一般是生长期（4月下旬至10月上旬）用刀具把根茎部切断，除去露出部、灭菌、水洗后在解剖显微镜下用刀具取出。

培养

培养工程是按新芽（叶片，叶柄，幼芽愈合体素）形成，增殖（分化）以及生根的顺序三个工程来进行。这些各个工程都是根据适宜的培养方法以及适宜各个工程的培养基的选择来决定适当的培养条件。

培养基是由一般的基础培养基也就是在无机盐组成里含有碳（C）源，维他命类等有机物主要成份的含成培养基加上特定的形态生长激素及分化促进而形成的。

本发明的特征是在上述新牙形成、增殖（分化）的前二个工程里、是使用萘乙酸或者β吲哚基乙酸的任何一种来作为形态生长激素，而作为分化促进激素则使用苄基腺嘌呤，苄基腺嘌呤是可以以核苷即苄腺甙代替使用。

上述萘乙酸的浓度一般可在1.1×10^-5-4.2×10^-5mol/l范围内使用，较好的范围是2.1×10^-5-4.2×10^-5mol/l，最适宜的使用约为2.1×10^-5mol/l。而在1.1×10^-5mol/l以下分蘖度就不允分，在4.2×10^-5mol/l以上，特别在5.3×10^-5mol/l就有出现药害的倾向。