[其他]制备茗萘酊的方法及其应用无效

专利信息
申请号: 85107267 申请日: 1985-09-28
公开(公告)号: CN85107267A 公开(公告)日: 1987-04-08
发明(设计)人: 罗斯·温特沃思·斯蒂芬斯;杰弗里·菲利普·戈尔德;尼尔·霍华德·戈斯;东尼·玛里·安塔里斯 申请(专利权)人: 澳洲生物科技公司;澳大利亚国立大学
主分类号: C12P21/00 分类号: C12P21/00;A61K37/02
代理公司: 中国专利代理有限公司 代理人: 巫肖南,李雒英
地址: 澳大利亚*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 制备 茗萘酊 方法 及其 应用
【说明书】:

发明是基于发现了在人类血液单核细胞的粘附单层的培养上清液中包括了茗萘酊,这是尿激酶类的胞浆素原活化剂的有效钝化剂。茗萘酊是这种胞浆素原活化剂的天然钝化剂,而这胞浆素原活化剂与侵入性的肿瘤有关,因此,茗萘酊是体内防御肿瘤的入侵和转移的关键元素。另外,茗萘酊亦有其他潜在的用途,可在人类的医药范围内作为临床的药剂,亦可为各类的癌症作离体和活体的诊断和治疗。茗萘酊亦可从巨噬细胞和源自单核细胞的转化细胞的培养中隔离和辨认出来。

按本发明的第一个目标,提供了一种充分地净化的产物,茗萘酊,这种茗萘酊是尿激酶类的胞浆素原活化剂的专性钝化剂。本发明亦提供了一种含有茗萘酊尿激酶类的胞浆素原活化剂的专门灭活剂)的培养上清液,该培养上清液是由生产茗萘酊的细胞离体地培养而得来的。本发明更进一步地提供一种由拥有茗萘酊的培养上清液而得来的产物,其中的茗萘酊至少是局部净化的。茗萘酊另外的特点在下面详细地描述。

本发明的另外一个目标是提供一个生产茗萘酊的方法,这方法包括离体地培养生产茗萘酊的细胞及回收培养上清液,可从培养上清液中回收至少局部净化的茗萘酊。可以培养而生产茗萘酊的细胞包括人血的单核细胞、某些巨噬细胞和转化的人类细胞系,以下会更详尽地透露这些细胞。拥有从细胞分泌出来的茗萘酊的培养上清液可以经过处理,以便将所含的茗萘酊浓缩,然后把上清液再处理,把培养上清液中其他组分移走,以便生产出至少局部净化的茗萘酊。这种的浓缩和净化可以靠例如在苯基-琼脂糖上的疏水交互作用色谱法或在在二乙基氨基乙醇-琼脂糖上的离子交换色谱法来达到,然后把所须产物洗提,这产物可在如西巴扩安蓝-琼脂糖(Cibacron    Blue-Seph-arose)或羟基磷石灰上进行的亲合色谱法来净化,以便不含茗萘酊的产物中移去更多的杂质。

试验证实茗萘酊是一种蛋白质,其特征是其表观分子尺寸大约为60-70,000(用凝胶过滤色谱来测定),而它的抑制作用专门是对作Mr    52,000(HPA    52和36,000(HPA36)的胞浆素原活化剂(如尿激酶)特别有效,证据包括ⅰ)它可抑制依赖于胞浆素原的纤维蛋白溶解作用,ⅱ)它可在比色测定中抑制胞浆素原的活化作用,和ⅲ)在培养介质中预先培育后,会不逆地失去胞浆素原的活化作用(可用电泳现象来证明)。由茗萘酊和HPA36型的胞浆素原活化剂所形成的复合体可防洗涤剂,其特征是其Mr在70-75,000的范围内。

进一步显示出茗萘酊优先地抑制尿激酶类的胞浆素原活化剂,而不是胰蛋白酶、胞浆素或“组织”类的胞浆素原活化剂(HPA66    66,000Mr的活化剂)。

茗萘酊不只从人类的单核细胞中生产出来,还可以用某种巨噬细胞和巨噬细胞谱系的转化细胞来生产。特别是把腹膜和骨髓的巨噬细胞培养于粘附单层的培养中,这些巨噬细胞可生产和分泌出相当大量的茗萘酊。当培养于地塞米松时,人类的巨噬细胞系(U937)亦可生产出茗萘酊。在本发明在这方面的进一步发展中,粘附单层培养的血液单核细胞的茗萘酊的生产可受到细胞的活化所刺激或增强,这是由于采用了胞壁酰基二肽(辅助肽)、细菌的脂多糖或活化的人类淋巴细胞的含淋巴激活素的培养上清液。

当加在人类结肠癌细胞系,COL0394的培养时,茗萘酊专门地把浆胞素原活化剂灭活,这可从比色测定和电泳现象中见到。另外,茗萘酊亦可专门地抑制从外科切除所得的人类肿瘤组织的匀浆中浆胞素原活化剂的活动。曾经有人用实验说明出,在肿瘤组织中的浆胞素原活化剂比在相应的结肠中普通组织的浆胞素原活化剂为高。其他的研究者从很多的实心肿瘤中亦记录了相似的观测结果。

因此,由于茗萘酊对尿激酶类的胞浆素原活化剂的专一性和在肿瘤组织内的胞浆素原活化剂含量大大地增强,这产物亦可在组织标本和活体中探置和确定肿瘤的界限,因此,茗萘酊可以活体地描绘肿瘤,特别是在生产胞浆素原活化剂的实心肿瘤如乳房、前列腺、结肠和肺的肿瘤可用茗萘酊来确定。虽然这类癌症通常会受外科的干预而矫正,但茗萘酊是特别有用于辨认外科干预后才形成的细小的转移癌症。由由茗萘酊是一种天然的产物,它的优点是没有抗原性,以及可避免体内的清除作用。当活体地描绘这种肿瘤时,可用标记的茗萘酊〔例如用适当的放射性同位素(如锝99)〕,当施用后,用茗萘酊所描绘的肿瘤的位置和界限可用众所周知的放射性同位素步骤测定。

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