[其他]金属螯合物的单克隆抗体

说明书

本发明涉及一些单克隆抗体、涉及具有螯合剂的金属离子螯合物，以及把这些单克隆抗体应用于诊断和治疗。

单克隆抗体已越来越广泛地成为诊断治疗疾病和了解生理状况的重要工具。它们也有希望应用于工业，例如：从非亲合纯化法难以提纯的混合物中，提纯商业上有价值的材料。

上述各种应用中，选择抗体是基于其与抗原结合的能力。某些应用过程，抗体可不用修正地加以使用。例如：用未加修正的抗体进行被动治疗。然而，大部分应用过程，包括最通行的商业上的应用，常是用一种以某种方式修正了的抗体。该抗体可能是结合到一种固态物上，并在亲合纯化或免疫测试中，作为一种免疫吸附剂使用。

在另一些应用中，抗体可用放射性核素标记，这种放射性核素标记的抗体诊断时，用于鉴定抗原，或用于活体内的示踪。经用放射性核素，药品或毒物标记的抗体也可用于治疗。

标记单克隆抗体的复杂性在于，每一抗体为一独立的化合物，具有其自身的特异性标记。所以，简单、有效标记方法是非常重要的。

在这一方面，我们建议：通过一种金属螯合剂螯合金属，用金属的放射性核素标记单克隆抗体。螯合剂首先与选择的单克隆抗体结合。由于相同的螯合剂可以结合一系列不同的金属，因而需要制定该螯合剂结合抗体最优的化学程序，以使该螯合剂将要结合的某种放射性核素能标记抗体。当这个程序大大地简化用放射性核素标记单克隆抗体时，仍需要测定抗体与螯合剂各种结合的最优条件。

我们惊奇地发现，可得到的单克隆抗体，可同某种螯合剂与特定金属组成的螯合物相结合。此结合优于该单克隆抗体同螯合剂本身的结合，或同螯合剂与其它金属组成的螯合物的结合。例如：我们用铟（Ⅲ）金属与L-氨基苄乙二胺四乙酸的螯合物结合到作为免疫原的锁眼血兰蛋白上，而得到一种单克隆抗体。免疫原与铟（Ⅲ）螯合物的亲合常数大于10⁹M^-1。与其相比，该抗体同L-氨基苄乙二胺四乙酸与其它金属离子的螯合物的亲合力低得多（结合常数＝10⁸M^-1，或更低）。

抗体对螯合物显示的特异性可用于把放射性核素结合到抗体上，也用于纯化微量金属和下述的其它用途。

如上所述，本发明提供了对某种螯合剂与特定金属组成的螯合物有特异性结合的单克隆抗体。此种特异性结合的亲合力强于该单克隆抗体与螯合剂本身的结合，或该螯合剂与其它金属组成的螯合物的结合。这里用的单克隆抗体被认为对一种特定金属和螯合剂形成的螯合物显示特异性，因为，该抗体与螯合物的结合常数大大地高于（10倍于）该抗体与螯合剂本身或螯合剂与其它金属组成的螯合物的结合常数。用于本发明的螯合剂是由Adams等人发现的，已于1981年10月27日申请专利，专利号为：315，206，已在参考文献中披露，下面的试验表明：本发明是用L-氨基苄乙二胺四乙酸的铟（Ⅲ）金属螯合物作为半抗原。

例Ⅰ：制备L-氨基苄乙二胺四乙酸与铟（Ⅲ）金属螯合物。

锁眼血兰蛋白9.3毫克在265微升pH9的水溶液中与L-SCN-CH-CHEDTA在36℃下反应8小时。然后与90微升0.1摩尔柠檬酸铟混合，在1毫摩尔EDTA，0.15摩尔的氯化钠溶液中透析，测定在310毫微米处，硫脲基团的吸收光谱，结果测出每毫克蛋白中含螯合物0.1毫克。

例Ⅱ：制备单克隆抗体

产生抗体的杂交细胞系制备如下：用上述抗原重复免疫BALB/C小鼠，取其脾细胞，把它们与P3.653骨髓瘤细胞系的变种融合，（见“单克隆抗体”一书，Gerhard著，Kennett等人编辑，Plenum出版，纽约，1980年），所得杂交细胞用固态第二抗体放射免疫测试筛选之，使其能与铟-氨基苄-EDTA相结合（Wang等人，“免疫方法杂志”，18卷，157页，1977）。根据未标记抗原结合抑制所示的测定的高滴度和相应地高亲合力，我们选出、命名两种抗体：CHA255和CHB235，并对它们进一步研究，将其注射到BALB/C小鼠腹膜腔内，形成腹水。从这些鼠的腹水中通过DEAE纤维柱离子交换层析，来纯化单克隆抗体。（Parham等人，在免疫方法杂志，53卷，133页，1982年）。

例Ⅲ：测定结合常数