[其他]尿嘧啶核苷的制备

说明书

本发明涉及一种生产尿嘧啶核苷的发酵法，尿嘧啶核苷作为一种生化试剂（参阅MethodsinEnzymology，Vol.VI.AcademicPress，NewYorkandLondon，1963，P.194）或合成药物的起始原料（参阅CollectionCzechosiov.Chem.CommunVOl.39，3100-3108，1974;BulletinoftheChemicalSocietyofJapan，Vol48（7），2084-2090，1975;Chem，Pharm，Bull.，Vol.19，2466-2471，1971）是很有用的。

到目前为止，从所周知发酵法生产尿嘧啶核苷是使用一从小单孢子属（genusMicromonos）菌株衍生出来的嘧啶类似物抗株〔JapanesePatentPublication（laidopen）No.139786/1977（Tokukaisho52-139786）〕和从短菌属（genusBrevibacterium）菌株衍生出来的嘌呤类似物抗株〔JapanesePatentPublication（laidopen）No.38691/1983（Tokukaisho53-38691）〕。在上述方法里，在培养基中同时累积尿嘧啶和尿嘧啶核苷酸。

本发明提供一种用杆菌属（genusBacillus）的微生物生产尿嘧啶核苷的方法。这种方法产率高，有利于工业化生产，而不同于前面指出的使用小单孢子属和短菌属微生物的方法。

本发明者对用杆菌属菌株生产尿嘧啶核苷的发酵法进行了深入细致的研究，结果发现了一种属于杆菌属的微生物，它缺乏尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性并且对嘧啶类似物具有抗性。这种微生物在培养基中能产生和累积足量的尿嘧啶核苷。基于对此发现的不断研究，完成了这个发明。

因此，本发明提供了一种生产尿嘧啶核苷的方法，此法包括在一种培养基里培养一种产生尿嘧啶核苷的微生物，它属于杆菌属，缺乏尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性并且对嘧啶类似物具有抗性，因此引起尿嘧啶核苷在该培养液中的形成和累积，并回收累积的尿嘧啶核苷。

所谓的“缺乏尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性”微生物意指该微生物具有的尿嘧啶核苷核苷磷酸化酶活性值不大于0.01单位（毫微摩尔/最小量）/mg蛋白质，此系据J.J.Scocca法测定的。（“MethodsinEnzymology”，Vol.LI，editedbyP.A.HoffeeandM.E.Jones，AcademicPress，NewYork，1978，P.432，此文公开的内容通过参考引用于本文。“对嘧啶类似物具有抗性”的微生物意指用杆菌属的菌株作为亲本菌株而衍生出来的微生物，在遗传特性方面被改变使得它能在含有高浓度嘧啶类似物的培养基中生长，即可以在不低于亲本菌株不能生成的培养基浓度的两倍，最好是不低于三倍的浓度中生长。“嘧啶类似物”意指一个结构如尿嘧啶和胞嘧啶这样的嘧啶碱类似物质，如6-氮尿嘧啶，2-硫尿嘧啶，5-羟基尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，以及它们的核糖核苷或核糖苷酸。抗嘧啶类似物的微生物充分条件是至少对一种嘧啶类似物具有抗性。

本发明实际应用的微生物代表例是枯草芽孢杆菌ST-58（BacillussubtilisST-58）（IFO14387，FERMBP-855，CGMCC0041）、枯草芽孢杆菌STA-17（BacillussubtilisSTA-17）（IFO14388，FERMBP-856，CGMCC0041）、枯草芽孢杆菌SA-85（BacillussubtilisSA-85）（IFO14389，FERMBP-860，CGMCC0046）、地衣芽孢杆菌LA-2（BacilluslicheniformisLA-2）（IFO14391，FERMBP-857，CGMCC0043）和短小芽孢杆菌PT-42（BacilluspumilusPT-42）（IFO14390FERMBP-858，CGMCC0044）。