[其他]冬虫夏草菌丝的工业生产方法

说明书

本发明属于真菌工业发酵技术。

冬虫夏草系我国传统名贵药材，分布在青海、四川、甘肃、云南、西藏等省山区的雪线以上，生长期长，药源稀少，远远不能满足滋补、防病、治病的需要。

冬虫夏草是虫草真菌孢子，感染于蝙蝠蛾类幼虫，于气温适宜时长出子座，称之为草，即形成虫菌复合体，采集来做为药用，称之为冬虫夏草。

本发明所指的冬虫夏草菌丝，系由新鲜天然冬虫夏草标本中分离纯化得出的菌种，进行人工发酵生产所得的冬虫夏草菌丝体产品。

目前国内研究已证实，人工培养的冬虫夏草菌丝与天然冬虫夏草在化学成份、药理作用以及临床疗效等方面基本一致。此结果见（85）晋医总科鉴定第1号文件（冬虫夏草技术成果鉴定书、山西省医药总公司）。

本发明的目的系研究冬虫夏草菌丝的工业生产方法，研究结果产率比目前国内先进水平有所提高。本发明冬虫夏草菌丝收率达3～4%（发酵液体积对菌丝重量比），目前国内先进水平为1.5%。

本发明详细说明如下

Ⅰ冬虫夏草菌种的分离

将天然冬虫夏草菌核洗净、消毒，切成薄片，用每毫升含500～1000单位链霉素溶液浸泡2小时，然后取出薄片，放在平板培养基上（平板培养基同下述斜面培养基）静止培养10天，即可见白色菌丝从薄片上长出，将白色菌丝进一步分离纯化，可得出冬虫夏草菌种，此菌种经中国科学院微生物研究所（陈庆涛教授）鉴定，为被孢霉属（Mortierella    SP）真菌菌丝。

Ⅱ菌种培养基和培养方法

1.斜面培养基成份及制作

葡萄糖1%、蛋白腖1%、蚕蛹粉1%、磷酸二氢钾0.15%、磷酸氢二钠0.1%、琼脂2%、PH7。

将上述成份混合后，定容至一定体积，压力1公斤/平方厘米，灭菌30分钟，分装在试管中，每管5毫升，制成斜面。

2.斜面培养方法

在无菌条件下，将一环冬虫夏草菌丝转接在空白斜面上，在24℃～28℃恒温箱中培养7天，即可为种菌使用。

3.摇瓶培养基成份及制作

葡萄糖6%、蛋白腖2%、蚕蛹粉2%、磷酸二氢钾0.15%、磷酸氢二钠0.1%、PH5。

将上述成份混合后，定容到一定体积，用氢氧化钠或盐酸调PH到7.5。然后分装到容积为500毫升的三角瓶中，每瓶100毫升培养液，压力1公斤/平方厘米，灭菌30分钟。

4.摇瓶培养条件

在无菌条件下，将1/4支斜面接入摇瓶中，在24℃～28℃恒温室中静止培养3天，然后在同样温度下，在往复式摇床上振荡培养3天，往复式摇床振荡频率110次/分，振幅5厘米。

5.种子罐培养基及制作

培养基成份同摇瓶培养基，制作方法也相同。种子罐装液量为总容积的70%，压力1公斤/平方厘米，灭菌30分钟。

6.种子罐培养条件

在无菌条件下，将摇瓶种子液转接入种子罐中，接种量1/10～1/20，培养温度24℃～29℃，搅拌转速250～350转/分，风量0.5～1∶1（V∶V），培养时间24～30小时。

Ⅲ发酵培养基和培养方法

1.发酵罐培养基成份及制作

葡萄糖6～9%、蛋白腖1～2%、蚕蛹粉1～2%、磷酸二氢钾0.15%、磷酸氢二钠0.1%、灭菌前PH7.5，消泡油适量。

发酵罐装液量为总容积的70%，灭菌压力为0.8～1公斤/平方厘米，灭菌时间为30分钟。

2.发酵罐培养条件

将种子罐培养好的种子液接入发酵罐中，接种量1/10～1/30，在24℃～29℃下培养，搅拌转速200～250转/分，风量1-2∶1（V∶V），罐压0.5公斤/平方厘米，培养时间为40～48小时。

Ⅳ后处理

1.分离菌丝

终止发酵后，用板框压沪机或离心机收集菌丝，离心转速为3000转/分，用水洗菌丝2～3次。

2.干燥菌丝

将湿菌丝放入烘房干燥箱中，气流干燥，干燥温度为60℃～100℃

Ⅴ工艺流程

斜面→500毫升摇瓶→5，000毫升摇瓶→100立升种子罐→1000立升种子罐→10，000立升发酵罐→离心分离菌丝→干燥菌丝→粉碎包装。