[发明专利]胞苷和/或脱氧胞苷的生产方法

说明书

本发明是有关胞苷和/或脱氧胞苷生产的方法及微生物。

胞苷和脱氧胞苷可用作合成药物的原料。本发明是关于a）利用发酵生产胞苷和/或脱氧胞苷的方法，和b）使用在上述方法中的芽孢杆菌（Bacillus）属的微生物。

利用发酵作用生产胞苷的已知方法包括a）使用枯草芽孢杆菌（Bacillus    subtilis）或雷极氏变形杆菌（Proteus    rettgeri）变种的方法（日本特许公开No21499，1961年）b）使用由短杆菌（Brevibacterium）属细菌诱导而得的一种抗嘌吟类似物系，抗嘧啶类似物系和/或抗组氨酸类似物系的方法（日本特许公开No18871，1982年），和c）使用由小杆菌（Microbacterium）属细菌诱导而得的抗嘌呤类似物系的方法（日本特许公开No18872，1982年）。

然而，在培养介质中产生和积累大量脱氧胞苷的方法不得而知。

本发明提供了一个在有关产量等方面，更有效生产胞苷和脱氧胞苷的工业方法。

发明人经过对产生胞苷和脱氧胞苷的细菌进行大量的研究工作后，发现对嘧啶类似物有抵抗力的，缺乏胞苷脱氨酶活力的芽孢杆菌属的微生物在培养介质中产生和积累了大量的胞苷和/或脱氧胞苷，在这一发现的基础上，继续研究完成了本发明。

本发明包括（1）胞苷和/或脱氧胞苷生产的方法，其特征在于把对嘧啶类似物有抵抗力的，有产生胞苷和/或脱氧胞苷能力的，缺乏胞苷脱氨酶活力的芽孢杆菌属的微生物培养在培养介质中，以收集在培养介质中所产生和积累的胞苷和/或脱氧胞苷，和（2）对嘧啶类似物有抵抗力的，缺乏胞苷脱氨酶活力的枯草芽孢杆菌。

在本发明中，对“缺乏胞苷脱氨酶活力系”，“抗嘧啶类似物系”，“嘧啶类似物”分别作如下的定义：

缺乏胞苷脱氨酶活力系

当采用通过超声作用破裂的细胞所获得的离心上层清液部分，按D.F.Wentworth等人的方法（“酶学方法”第LI卷，P.A.霍菲和M.E.琼斯编写，科学出版社，纽约，1978，P.401）测定时，其胞苷脱氨酶活力度小于0.01单位/毫克-蛋白质的微生物。（酶活力是1毫微摩尔（nM）胞苷在一分钟内被脱氨就定义为一个单位）

抗嘧啶类似物系

由芽孢杆菌属细菌诱导而得的微生物，它们的遗传特性已改变为使它们在对其亲代系生长来说含嘧啶类似物浓度过高的培养介质中也能生长。

嘧啶类似物

一种有与嘧啶骨架类似结构的物质，例如：尿嘧啶和胞嘧啶;如：6-氮尿嘧啶，2-硫尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，5-氟乳清酸和它们的核苷和核苷酸。至少对这些物质中一个有抵抗力的微生物被称为“抗嘧啶类似物系”。

在本发明中所使用的微生物是枯草芽孢杆菌AU-50（CGMCC    No.0048），枯草芽孢杆菌FU-11（CGMCC    No.0049），枯草芽孢杆菌6AU-500（CGMCC    No.0050）和枯草芽孢杆菌2TU-200（CGMCC    No.0051），并且已于1985年10月1日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）。

在它们中间，枯草芽孢杆菌AU-50和FU-11系是由枯草芽孢杆菌（IFO    13719，ATCC    6051）诱导而得的，6AU-500和2TU-200系是由枯草孢杆菌No    122（IFO    14386，FERM    BP-859）诱导而得的。

枯草芽孢杆菌AU-50，FU-11，No122菌株和枯草芽孢杆菌6AU-500，2TU-200菌株也分别于1984年10月19日和1984年12月3日寄存在日本通产省工业科学技术院发酵研究所（FRI），寄存号为FERM    P-7911，P-7912，P-7908，P-7971和P-7972，上述寄存物现已变成布达佩斯条约下的寄存物，贮存在FRI，寄存号为FERM    BP-907，BP-908，BP-909和BP-910。

上述的亲代系中，枯草芽孢杆菌（IFO13719，ATCC6051）是一个已知的系，它在1978年由大坂发酵研究所发行的第六版的“培养物表”中以及1982年由美国典型培养物保藏中心（ATCC）所发行的第十五版的“菌株I的目录”中已有记叙，而枯草芽孢杆菌No122（IFO14386，FERM    BP-859）是一个由发明人新从土壤中分离而得的系。No122系的菌学特性如下所述：

A、形态学