[其他]专门测定胰α-淀粉酶的方法和试剂

说明书

本发明涉及一种在有唾液α-淀粉酶存在时，专门测定胰α-淀粉酶的方法和试剂。

α-淀粉酶（E.C3.2.1.1）在打开1，4-α-糖苷连接的寡糖和多糖时，主要是随机地水解1，4-α-糖苷键，生成麦芽糖和麦芽-寡糖。除了酶在工业发酵技术中的用途以外，酶在临床分析和诊断领域中也被认为是很重要的。因此，在某些疾病中，α-淀粉酶在体液中的含量，例如在血清，尿和十二指肠分泌物中的含量，会有相当的改变。然而，在体内事实上存在有两种α-淀粉酶，即胰酶和唾液酶。因为只有胰酶在诊断中具有重要性，所以存在着的分析性的任务是，在有其它不常见并以小量存在的酶存在时，区分这两种α-淀粉酶。困难的是，这两种多重形式具有相似的结构并且在免疫学上也相同（见K.Lorentz，Laborat    or    iumsblatter，32，118/1982）。为了消除唾液酶的活性，已知可使用阴离子交换剂吸附，麦蛋白抑制，电泳或电聚焦的方法。但是这些方法，要么是其分离作用不能令人满意，要么就是对常规诊断来讲太实验室化了。在以上所述及的方法中，对常规诊断来讲尚可接受的方法是描述于Clin.Chem.28/7，1525-1527/1982，它用从麦胚中获取的抑制剂抑制唾液型酶，但耗费时间，并且选择性也不能令人满意。甚至在最佳的抑制剂浓度时，仍保留了13%的唾液型酶活性，而胰酶的活性则被减少到81%。

在已有的，尚未公开的第84114172.4号欧洲专利申请中，已经提出了这样的建议，即在有对唾液α-淀粉酶起反应并显示出对胰α-淀粉酶的交叉反应活性为5%或更低的单克隆抗体存在时，在有唾液α-淀粉酶存在的情况下测定胰α-淀粉酶。用这种单克隆抗体，就可以在加入银沉淀剂的情况下，与唾液α-淀粉酶形成可从溶液中分离出的不溶性复合物，因此仅使胰酶保留在溶液中并且被测定。此外，用固定化形式的单克隆抗体也能分离唾液淀粉酶。但是，在这两种情况下，均需形成不溶性相并将其与可溶相分离开来。

因而，本发明的目的是克服这些缺点，并提供一种方法和试剂，从而可能在体液中，当有唾液型的α-淀粉酶存在时，不用进行这里所必须的相分离，就能快速，简便并可靠地测定胰α-淀粉酶。

这样，根据本发明，就提供了在有唾液α-淀粉酶存在的体液中，特别是在血清，血浆，十二指肠液和尿中测定胰α-淀粉酶的方法，即使用存在有单克隆抗体时检测α-淀粉酶的系统，其与唾液α-淀粉酶反应，其中所用的是专门抑制唾液酶并对胰酶的抑制不会高于50%的单克隆抗体。

本发明的方法是建立在对抑制唾液酶而并不抑制胰酶的单克隆抗体这一令人惊奇的发现之上。这一点在以往是没有料想到的，因为已知唾液酶和胰酶在免疫学上相同（见Gerhard    Pfleiderer，Lab.Med.，I，189-193，K.Lorentz，loc.cit.）。M.K.Schwarz在“Immunoassay    of    Enzymes-an    Overview”pp.4-9，1983，中述及，抗唾液α-淀粉酶的抗体对唾液型酶的抑制达78%并对胰型酶抑制达75%。因此，以往无法预见到可以创出这样的单克隆抗体，即由于选择性地，高度特异性地抑制从而可能实际上定量地区别这两种酶的单克隆抗体。用优选的抗体则获得了对唾液酶抑制达95%或更高的结果。

本发明的方法中所用的新型单克隆抗体已经储存于NCACC储存号为（99    D12）84122003和（89    E2）84122004（National    Collection    of    Animal    Cell    Cultures，Porton    Down，Great    Britain）。