[其他]系列载体式细菌培养基及其制备

说明书

本发明涉及细菌培养基及其制备方法。以往，细菌培养基都是以琼脂为基质，再加入某些细菌生长所需的营养剂、细菌生长产物的指示剂和对所需细菌以外的细菌抑菌剂等混合制成的。由于这种经典方法可以通过营养剂和细菌抑菌剂的选择和剂量调节，制备出适合于培养各种细菌的培养基，具有较好的选择性和广泛的实用性。所以，这种经典培养基及其制备方法沿用了五十余年，迄今未有改变。

但是，不容置疑，这种经典方法还是有其不足之处的，今列举如下：

一、由于细菌培养基是培养细菌时临时配制的，每次制备培养基都必须进行称量试剂，加水溶解，调节PH，高压灭菌，分装平皿，冷却凝固等一系列复杂的操作，相当费时、费工。

二、由于在制备培养基时，不论做很少几个或者很多个培养试验，都需要经历操作的全过程，所以在使用少量的培养基时，试剂和人力的浪费是相当可观的。

三、虽然剩余的或者预先制备的培养基液可以保存在冰箱中，但是保存时间不能太长，因为一旦长菌就不能再用;另外，保存太占空间，影响冰箱的利用率，难以克服浪费。

四、因培养基只能浇注在平皿中或者贮存在三角烧瓶等玻璃容器中，不便于挪动，又容易破损。

五、在用三角烧瓶内的培养基时，必须用水浴加热1～2小时，使培养基融化，再注入平皿，待其凝固后再使用，比较费时。

本发明的目的在于：提供一种制备方便、价格较低、容易保存、使用方便、效果优良的系列纸片式培养基及其制备方法。这种系列纸片式培养基与相应的琼脂培养基（例如：肉汤琼脂、肉汤马血清琼脂、SS琼脂、伊红美兰琼脂、高盐琼脂等）具有完全相同的效果。

纸片式细菌培养基的制备：

用细菌生长营养剂、细菌产物指示剂和所需（培养）菌以外的细菌抑菌剂制成细菌培养液（适合于各种不同细菌培养的培养液，可以通过对上述营养剂、抑菌剂等的选择和剂量控制制备），经高压灭菌制成无菌培养液;取特制的中性滤纸（约500g/m²）切成所需形状和大小的纸片（一般为φ50～90mm的圆片），经高压灭菌（15磅、20分钟），将此纸片浸入用上述试剂制成的无菌培养液，使纸片吸足培养液，取出摊开，在低于80℃的温度下干燥，制成含培养液的“纸片”;在无菌室内，用不影响细菌生长的化学浆糊或其它粘合剂涂在干燥“纸片”边缘，使粘合剂成为宽度为1～2mm的环形薄层，再把与上述“纸片”同样大小的孔径小于0.45μ的微孔滤膜（该膜可用硝化纤维素酯、醋酸纤维素酯或混合纤维素酯，也可用质 地致密的有弹性的纤维素材料，如：纸等制作）与上述“纸片”重合并粘好（注意：在粘合前务必把对合的两面用紫外线灭菌）干燥后，装入塑料袋并封口，再用紫外线辐照两面，灭菌后即成产品“纸片式细菌培养基”。此产品耐干、耐湿、耐热、耐寒，可保存较长时间。还需指出：（1）所有目前使用的琼脂培养基都可以用上述方法制成“纸片式培养基”;（2）本培养基可以不用琼脂，其它成份与经典的琼脂培养基基本上相同;（3）上述纸片也可用其它多孔材料代替。

为了改善检菌试验的观察效果，在制备培养基时，可在培养液内加入细菌染色剂，或者通过剂量控制来达到目的;为方便地使用某些特种培养基，在制备时须采取特种方法。例如：

在制备普通肉汤或肉汤血清纸片式培养基时，可在培养液内加入 1/100 培养液体积的0.1%TTC（2、3、5-氯化三苯基四氮唑）细菌染色剂，使生长的细菌菌落呈红色，在白色纸片的陪衬下更显鲜明，易于早期识别。

制备伊红美兰纸片式培养基时，试剂伊红和美兰溶液可按常规剂量加倍。这样，使生长的大肠菌群呈紫红色，易于观察和早期识别。

在制备与血琼脂相当的血纸片式培养基时，可把肉汤与脱纤维羊（或兔）血以100∶5～10的比例混合，然后从微孔滤膜面加入，直至饱和（最好再过量一些），使膜面形成血的薄膜，便于使用，所加 培养液的量务必适度。

本培养基的使用方法：

剪开塑料袋，用无菌镊子夹取纸片，放入无菌平皿（注意：滤膜面向上），从纸片边缘加入无菌蒸馏水，使纸片湿透至饱和，倾出平皿中的余水，用实验材料（例如：传代细菌，培养痰、粪便、脓、尿或者其它分泌物等）作划线接种，盖好平皿，翻扣于温箱内培养，次日观察菌落。（如果平皿质量差而不能密闭，倒扣后，在上盖中加入1～2mL无菌蒸馏水，以维持皿内湿度）。

接种时，因所加之水很难将吸附在纸片上的试剂完全溶析，会影响培养基成份，为了改善培养条件，制备纸片式培养基的各种试剂剂量最好要适当增加（必要时，可加倍）。