[其他]白细胞介素－2的生产方法

说明书

本发明有关一种生产白细胞介素-2的方法。

白细胞介素-2（以下简称为IL-2，也称为T细胞生长因子（TCGF）]是由凝集素、同种异型抗原等刺激T细胞而产生的一种淋巴因子。（《科学”杂志，193卷，1007页，1976年）

利用IL-2可获得许多克隆，诸如：T杀伤细胞克隆、T辅助细胞克隆和天然杀伤细胞的克隆等等。（《自然》杂志，268卷，154页，1977年）。除了将其直接用于T细胞或天然杀伤细胞克隆化之外，IL-2也可用于特异抗原T杀伤细胞的体外增殖。这种特异抗原的T杀伤细胞能够识别并摧毁诸如肿瘤抗原等特异抗原。还可以通过把这样增殖的肿瘤特异性T杀伤细胞转移至动物，来抑制肿瘤的生长（见《免疫学杂志》，125卷，1904页，1980年）。

这些试验结果意味着应用IL-2作为一种抗肿瘤制剂具有很大的潜力。人们已知，IL-2具有促进缺乏胸腺裸鼠，T辅助细胞恢复的功能（见《欧洲免疫学杂志》，10卷，719页，1980年）;也有促进T杀伤细胞诱导生成T辅助细胞的功能（见《自然》杂志，284卷，278页，1980年）。因此，IL-2可望被用于治疗免疫缺陷性疾病。

从人的T细胞可得到人的IL-2，但其数量极为微小。然而，由于近年来基因重组技术的发展，可以通过培养含有IL-2基因重组载体的大肠杆菌，得到作为生物活性蛋白的人IL-2。（见《自然》杂志，302卷，305页，1983年和《核酸研究》，11卷，4307页，1983年）

通常生产人IL-2的方法，由于其产率低，不适合工业应用。在这种情况下，本发明者大量研究了培养能够生产IL-2的大肠杆菌的方法。发现将大肠杆菌培养在PH4.8-6.0的酸性条件下，但必须在大约PH6.5-7.5中性或弱碱性条件下发酵，就能可观地改善IL-2的产率（见《生化工程》，东京大学出版，25-26页，1965年）。

基于上述发现，发明者进一步研究得到了本发明的成果。

本发明提供了一种生产白细胞介素-2的方法。就是在培养基中培养能生产白细胞介素-2的大肠杆菌转化体，将其接种到PH4.8-6.0的培养基中，使其在该PH范围内生长。

上面所说能生产IL-2的大肠杆菌具有用基因重组技术得到的IL-2基因，或是具有一个与IL-2生理活性相似的肽编码的DNA。

本发明推荐使用哺乳动物的IL-2基因，可优选人们的IL-2基因编码，其氨基酸顺序如图1所示（含1-133个氨基酸）。其中该基因的碱基顺序（密码1-133）示在图2。

还包括下述一些肽编码的DNA，其生理活性与IL-2相似。一个DNA，其氨基酸顺序如图1所示，其中半胱氨酸密码（如：125位半胱氨酸）被丝氨酸或苏氨酸密码所替换;另一个DNA，具有与IL-2相同的氨基酸顺序，但其N端的四个氨基酸编码的片段被除去。（见日本专利公告126088/1985）。

上述基因（DNA）必须有一个启动子或上游启动子。可用的启动子包括色氨酸（trp）启动子，乳糖（Lac）启动子，蛋白链加长因子Tu（tuf    B）启动子和rec    A启动子等等。本发明优选使用的是色氨酸启动子。

上面提及的基因和启动子一般转化到一个质粒中作为转化载体，最常用的是PBR    322。它是质粒Col    El的衍生体（见《基因》，2卷，95页，1977年）。但也可用其它质粒，只要它们在大肠杆菌细胞中能被复制、保存便可。例如：PBR    313（见《基因》，2卷，75页，1977年）;PBR    324和PBR    325（见《基因》，4卷，121页，1978年）;PBR327和PBR328（见《基因》，9卷，287页，1980年）;PKY    2289（见《基因》，3卷，1页，1978年）;PKY    2700（见《生物化学》，52卷，770页，1980年）;PACYC    177和PACYC    184（见《细菌学杂志》，134卷，1141页，1978年）;以及PRK    248    PRK    646和PDF    41（见《酶学方法》，68卷，268页，1979年）。

作为表达载体的有：属于λgt系统的λgt·λc噬菌体、（《美国科学院学报》，71卷，4579页，1974年）λgt·λB噬菌体、（见《ibid》，72卷，3416页，1975年）λDam噬菌体（见《基因》，第1卷，255页，1977年）;卡龙载体（《科学》，196卷，161页，1977年和《病毒学杂志》，29卷，555页，1979年）和丝状噬菌体。