[其他]用重组DNA技术制备乙型肝炎颗粒的方法

权利要求书

1、一种重组DNA载体，该载体包括：

一种编码Pre S₁-Pre S₂-S编码区的DNA序列；和金属硫因基因的启动子。

2、权利要求1的载体，其中所述的金属硫因基因启动子是掺入到包括DNA序列的载体中取代或不取代天然启动子，优选的是在紧靠Pre S₁-Pre S₂-S蛋白编码区的上游处掺入。

3、权利要求1的载体，该载体进一步包括选择识别物，优选抗药识别物，如新霉素抗性基因，和/或转录终止位点，如SV40终止位点或小鼠珠蛋白基因的DEF区。

4、权利要求1的载体，该载体不含任何病毒基因碎片和/或不是致癌性的。

5、一种重组DNA多联体，该多联体包括权利要求1的载体作为第一载体和至少一种附加载体，该附加的载体包括下述编码区中的一种：Pre S₁- Pre S₂- S蛋白编码区，Pre S₂- S蛋白编码区或S蛋白编码区，和金属硫因基因的启动子。

6、权利要求5的多联体，其中的金属硫因基因启动子掺入到附加的载体之中，并且优选在紧靠Pre S₁- Pre S₂- S蛋白编码区的上游处掺入。

7、权利要求5的多联体，其中第一和/或附加载体包括转录终止位点，如小鼠珠蛋白基因的DEF区，以及/或选择识别物。

8、权利要求5的多联体，其中的DNA载体不含病毒碎片。

9、一种被转染的真核细胞，该细胞是被权利要求1至4中任一权利要求的重组DNA载体或权利要求5至8中任一权利要求的多联体转染的。

10、一种被联合转染的真核细胞，使用的被称作第一重组DNA载体的是权利要求1至4的重组DNA载体，和第二重组DNA载体，第二重组DNA载体包括Pre S₂-S蛋白编码区或S蛋白编码区和金属硫因基因的启动子。

11、一种被联合转染的真核细胞，其中使用权利要求1至4的重组DNA载体，被称为第一重组DNA载体，第二重组DNA载体包括Pre S₂-S蛋白编码区，第三重组DNA载体包括金属硫因基因的启动子和选择识别物，第三载体中的金属硫因基因启动子优选定位于紧靠选择识别物的上游处。

12、权利要求10或11的细胞，其中的金属硫因基因启动子掺入到第二载体中并且优选定位于紧靠Pre S₂-S蛋白编码区的上游处。

13、权利要求10或11的细胞，其中的第二和/或第三载体包括转录终止位点如小鼠珠蛋白基因的DEF区，和/或其中的第二载体包括选择识别物。

14、权利要求10或11的细胞，其中的第二和/或第三DNA载体不含病毒DNA碎片。

15、权利要求10或11的细胞，其中的DNA载体包括不同的选择识别物。

16、权利要求11的细胞，其中的第一，第二和/或第三载体包括复制子。

17、权利要求9至16中任何一项所述的细胞，其中的真核细胞是哺乳动物细胞，如中华仓鼠卵巢细胞，vero细胞，L-细胞，小鼠成纤维细胞和大鼠成纤维细胞。

18、一种制备权利要求9的真核细胞的方法，该方法包括：

用权利要求1至4中任何一项所述的重组DNA载体或权利要求5至8中任何一项所述的多联体转染真核细胞。

19、制备权利要求10的真核细胞的方法，该方法包括：

用权利要求1至4中任何一项所述的重组DNA载体或权利要求10和12至15中任何一项所述的第二重组DNA载体联合转染真核细胞。

20、制备权利要求11的真核细胞的方法，该方法包括：

用权利要求1至4中任何一项所述的重组DNA载体和权利要求11至16中任何一项所限定的第二和第三重组DNA载体联合转染真核细胞。