[其他]流感疫苗的制备方法无效

专利信息
申请号: 86103717 申请日: 1986-06-06
公开(公告)号: CN86103717A 公开(公告)日: 1987-02-11
发明(设计)人: 根路铭国昭;大谷明;大隈邦夫;井上敦郎 申请(专利权)人: 国立预防卫生研究所;第一制药株式会社化学及血清疗法研究所
主分类号: A61K39/45 分类号: A61K39/45
代理公司: 中国国际贸易促进委员会专利代理部 代理人: 穆德俊,唐越
地址: 日本*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 流感疫苗 制备 方法
【说明书】:

发明涉及一种新的流感疫苗,特别涉及一种自流感病毒获得的HANA抗原与胞壁酰二肽衍生物(以下称为MDP衍生物)人工合成囊泡样复合体颗粒组成的流感疫苗,HANA抗原为这种疫苗的活性成分,MDP衍生物为合成佐剂,这种人工合成颗粒在大小和形状上与天然发生的流感病毒颗粒相似。本发明还涉及制备这种新疫苗的方法。

由于目前使用的流感HA疫苗的接种效果受发生在流行病毒HA(血凝素)分子上的突变变异影响,因此开发较传统所用更为有效的疫苗成为紧迫的要求。

在流感疫苗开发方面的最新进展之一就是由HA和NA(神精氨酸酶)为主要成份的一种合成疫苗的出现,即流感HANA疫苗。形成的这种含有纯化HANA的疫苗在安全性和效果上被认为是一种理想的疫苗,并且在美国已被用于实践。然而,这种疫苗的效果实际上仍有不足之处。

从另一方面看,再有的进展就是佐剂的使用。这项工作已导致对胞壁酰二肽(MDP)及多种MDP衍生物的开发,适当的化学修饰使MDP衍生物作为新型佐剂材料在免疫潜能等方面得到改善。例如,Kotani等人在YAKUGAKU    ZASSHI这本期刊的1983年第103卷一期第1~27页上发表了有关这些MDP衍生物的报告。它们提到将6-0-(2-四癸基六癸酰基)MDP与含有高度纯化作为主要成分的HA和NA流感疫苗(即HANA)一起注射给豚鼠,并报告说已得到了有效的佐剂效应。然而,将MDP衍生物作为佐剂简单地加入疫苗所得到的HANA疫苗并不具有足够的作用。

因此,本发明的主要目的是提供一种较传统所用具有更良好的致免疫性的新型流感疫苗。

本发明的另一目的是提供一种包括人工合成囊泡样HANA抗原-MDP衍生物复合体颗粒的新型流感疫苗,此复合颗粒与天然病毒颗粒在颗粒大小和形状上几乎相同。

本发明的这些及其它的目的通过下面的描述会更清楚。

按照本发明,提供一种包括人工合成的HANA抗原复合物的囊泡样颗粒和至少一种MDP衍生物的流感疫苗,MDP衍生物组成此颗粒的膜(相当于天然流感病毒颗粒的脂膜),HANA抗原与MDP衍生物相连出现在此膜上以形成复合体,这样,此种复合体就与简单地将一种疫苗和一种佐剂混合得到的疫苗不同了。因此,按本发明所获得的人工合成HANA抗原-MDP衍生物复合体囊泡样颗粒就具有了与天然病毒颗粒几乎相同的颗粒大小和几乎相同的形状。

图1和图2分别为本发明的1号试样疫苗和2号试样疫苗的电镜显微照片(放大150,000倍);

图3为本发明4号试样疫苗的电镜显微照片(放大200,000倍);

图4代表用蔗糖梯度离心法所得到的密度区带的比较,以确定本发明的此种复合物的构成。

这种新的流感疫苗可用下述专门的方法制备。

首先在某种适当的缓冲液中,例如磷酸盐缓冲液,将流感HANA抗原与MDP衍生物以重量比10/1~1/300的比值混合后,再加入有效量的表面活化剂(0.1~10重量/体积%),使形成的混合物溶解。此后,用透析方法将这种表面活化剂除去,便得到一种新的HANA抗原-MDP衍生物复合体。在此,最重要的是要使用一种可经透析去除的表面活化剂。这类表面活化剂举例包括辛基苷、胆酸钠等。参考图1~3,得到的HANA抗原-MDP衍生物复合体形成所谓病毒体,在病毒体内MDP衍生物本身使人工合成囊泡得以形成,而HANA抗原则通过它们狭窄的未端与颗粒表面结合,使得它们与存在天然病毒颗粒表面上的此抗原具有相同的方位。

根据本发明的另一方面,MDP衍生物可与(Ⅰ)胆固醇(Ⅱ)卵磷脂和磷酸双鲸酯(dicetyl    phosphate)或(Ⅲ)即(Ⅰ)和(Ⅱ)的混合物等物质联合使用,这些物质具有促MDP衍生物的人工合成囊泡样颗粒形成的能力。在这种情况下,优先选用下列重量比值:

使用胆固醇:MDP衍生物/胆固醇=1/0~1/5,更优先选用的比值为1/0.5~1/2。

使用卵磷脂:MDP衍生物/卵磷脂=1/0~1/50,更优先选用的比值为1/1~1/20。

使用磷酸双鲸酯卵磷脂/磷酸双鲸酯=1/0.05~1/2,更优先选用的比值为1/0.5~1/1。

此外,与本发明的这个方面一致,并不一定必须使用表面活化剂及进行透析。从这点讲,本发明比经传统的形成NDP衍生物囊泡样颗粒的声波处理(超声波法),微量注射,反相脱水等方面为优。

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