[其他]医药用结晶葡萄糖的制法

说明书

本发明是关于医药用结晶葡萄糖、特别是作为注射用原料的结晶葡萄糖的制造方法，这种方法工艺过程简单、节能和成本低。

关于葡萄糖注射液的规格，在日本有作为药品质量标准的日本药典加以规定，其它各国也均有规定，但在商业交易时，要求在作为原料的结晶葡萄糖这一步就应符合药物质量标准，这是商业交易时的必要条件。为了达到这一标准，特别重要之点是：第一为葡萄糖的纯度，即比旋光度〔α〕²⁰_D应符合标准;第二不得含发热源等杂质。

关于比旋光度的标准各国均有规定，日本药典第十次修订版中为〔α〕²⁰_D+52.2°～53.2°，1985年美国药典中为+52.6°～53.2°，英国1980年药典规定为52.5°～53.0°，中国药典（广东暂行）为+52.5°～53.0°等。但是为了符合这些规定，对已获得的结晶葡萄糖，需要再次将其用水溶解，进一步再结晶，这种方法称为再结晶法。再结晶法以往采用使用α-淀粉酶及葡糖淀粉酶的淀粉水解工艺，在工业生产方面，只能达到DE97、葡萄糖含量为95%（重量）（对固态物而言），由精制、浓缩液得到的结晶葡萄糖的〔α〕²⁰_D仅为+53.2°～53.5°，所以就必须将已获得的结晶葡萄糖再次溶解，制成高纯度原液后，进行再结晶。其结果，使过程变得很复杂，消耗大量能源，产品收率降至50%以下，致使成本升高，在经济上是不利的。

所谓发热原是注射时有在人体引起发烧或发冷危险的物质，其代表物为微生物产生的内毒素。这种内毒素有来自原料淀粉者，有在糖化，精制工序中因微生物污染而造成者等等;但特别是在利用离子交换树脂处理工序中，因微生物污染而引起者很多。利用离子交换树脂的处理工序是由以下几步组成的：通常首先用阳离子交换树脂，再用阴离子交换树脂分别进行处理（双床工序）之后，进一步用两种树脂的混合体床层（混合床层）进行处理。如果使离子交换处理在高温下进行，有产生淀粉糖异构化反应和分解反应的危险，所以，历来离子交换处理通常在40℃以下进行。在这种温度下进行的结果，在离子交换树脂塔内容易产生微生物，即使将树脂再生，这种微生物也难以灭掉，经循环后，逐渐积累，不仅成为发热原产生的缘由，而且由于被处理的糖液发酵，使塔内压力上升，导致液体无法流通，再者，也有使洗涤排水增加等问题。

为了除去这种发热原，以往在葡萄糖液的精制工序中，采用大量的活性炭、或超滤膜和精密滤膜等，因此，不可避免使成本上升。

本发明的目的，是提供一种制造医药用、特别是注射用葡萄糖的方法，该葡萄糖符合日本及各国药典规定的标准。即提供了一种在淀粉水解工序中制得高纯度糖化液，这种高纯度糖化液在精制、浓缩后，可省去再结晶工序，同时可制得不含发热原等杂质的结晶葡萄糖，并且成本低、节能的工业生产方法。

发明者发现，在淀粉水解工序中同时采用脱支酶和葡糖淀粉酶，利用这种方法可得到含葡萄糖97.0%（重）（对固态物而言）以上的糖液〔低聚糖含量3%（重）以下〕，将此糖液在双床层阳离子交换树脂塔中在55℃以上、80℃以下处理精制，利用一次结晶操作就具有符合日本和各国药典规定的比旋光度，可以很经济地制出高纯度的注射用原料结晶葡萄糖。

在本发明中，首先将淀粉在DE6～15、最好在8～12，液化后，用盐酸或草酸调整pH为4～5，在90℃以上保持10分钟以上，使液化酶失活。再冷却至60℃，使脱支酶和葡糖淀粉酶作用，进行糖化。脱支酶是可以断开淀粉的α-1，6键的一种酶，具有这种作用的任何一种酶均可，例如丹麦诺沃（ノボ）公司生产的普罗摩扎姆（グルコァミラゼ）200L脱支酶等均很合适。再者，作为葡糖淀粉酶，用同一公司生产的AMG300L等就很合适，但并不限于这些酶制剂。关于这些酶的用量，如上述之普罗摩扎姆200L，对于每克固态物，最好在0.5PUN以上;AMG    300L，对于每克固态物，最好在0.3AGU以下。关于糖化条件，当浓度为30%（重）以下时，糖化时间最好在45小时以上，这样就可制得高DE值、高葡萄糖含量的糖化液，其中DE可达98.0以上，葡萄糖含量可达97.0%。

再者，脱支酶普罗摩扎姆每1PUN表示一种酶单位，它表示这种酶在0.2%的淀粉聚合物中，于40℃、pH为5.0的条件下作用后，在一分钟内可产生具有相当于1umol葡萄糖还原能力的还原糖。再者，关于葡糖淀粉酶AMG的1AGU所表示的酶单位，是以0.1M醋酸缓冲液每升10g麦芽糖为基质，在其中，于25℃pH为4.3的条件下作用时，在一分钟内，可分解1umol麦芽糖。