[其他]新型DNA和多肽

说明书

本发明涉及一种新的DNA和一种多肽。

人的乙型肝炎是由一种DNA病毒的乙型肝炎病毒（下称HBV）感染而发生的。HBV称为“载恩氏颗粒”。在这种病毒颗粒的表面存在有一种HBV表面抗原（下称HBs Ag）。而在颗粒的里面，则有HBV核心抗原（下称HBc Ag）和HBVe抗原（下称HBeAg），它们为具有部分单股的环状双股DNA。同时，在颗粒上已测出一种用来对双股DNA中的单股部分起修补作用的内源DNA合成酶的活性。HBV DNA的分子量是2.1×10⁶道尔顿。它是由大约3200碱基对组成的。已知HBs Ag有四种类型的抗原性，即以共同抗原“a”为其中心的adr，adw，ayr及ayw。

HBc    Ag可用作早期诊断受HBV感染者的诊断剂。亦即在人受HBV感染时，HBs抗体出现之前在血液里就诱发出抗HBc抗体。因此，一个人是否受HBV感染，在感染的早期就能够通过测定血清里的抗HBc抗体而确定。在预防HBV感染上，最近报导的HBc    Ag是有效的。

含有HBe    Ag的血液亦会有大量的戴恩氏颗粒，而且具有一种可引起HBV感染的危险。因此在治疗HBV感染的病人时，在血液里检查出HBe    Ag的存在是重要的而且在HBV感染的诊断上是必不可少的。

为了获得HBc    Ag及HBeAg，就必须收集戴恩氏颗粒并从中分离出HBc    Ag和HBeAg。由于在戴恩氏颗粒里所含的HBcAg及HBeAg的量极微，就要求一个能大量产生HBc    Ag及HBe    Ag且措施安全的方法。

根据本发明将会提供（1）一种由微生物产生的表现有乙型肝炎病毒e扩原性的多肽，和（2）一个重组体DNA，它包括有一个启动子，一位于该启动子下游的转译起始密码子，一为表现出有乙型肝炎病毒e抗原性的多肽而编码的，位于转译起始密码子下游的DNA片段，以及一紧接在该DNA片段后面的终止密码子，（3）一个重组体DNA，它包括有一个启动子，一个位于该启动子下液的转译起始密码子，一为表现出乙型肝炎病毒e抗原性的多肽而编码的，并位于该启动子下游的DNA片段，以及紧接在该DNA片段之后的一个终止密码子，其中在启动子的SD（Shine-Dalgarno）序列和转译起始密码子之间的核苷酸顺序是ATCGGGC，及（4）一种制备表现出乙型肝炎病毒C抗原性多肽的方法，它包括培养转化体，该转化体含有一个包括一启动子，一位于该启动子下游的转译起始密码子，一为表现出乙型肝炎病毒C抗原性的多肽而编码的位于启动子下游的DNA片段，以及一个紧接在该DNA片段之后的终止密码子，其中启动子SD顺序与转译起始密码子之间的核苷酸顺序是ATCGGGC。

HBc和HBe抗原都只能从受HBV感染的人或黑猩猩里自然地获得有限的量。处理这样被感染的生物体有受HBV感染的危险。本发明已解决了这些问题，并能大量地生产出类似自然抗原的表现有HBc或HBe抗原性的多肽，而且生产安全和经济。

图1表示adw-型HBV    DNA的整个核苷酸顺序;

图2表示adw型HBc    Ag的氨基酸顺序;

图3表示为adw型HBc    Ag编码的DNA的核苷酸顺序;

图4是构建质粒PTB368的图解;

图5是构建表达质粒HBe    Ag的图解;

图6表示大肠杆菌DH1/pTB368的产物的西部斑渍（Western    blotting）（1和2道）的结果;

图7表示用氯化铯平衡密度梯度离心大肠杆菌DH1/p    TB368产物的分析结果;

图8和图9表示用蔗糖梯度离心大肠杆菌DH1/p    TB368及DH1/p    TB441的产物的分析结果;

图10表示用HBe（HBc）放射免疫测定（RIA）检查家兔抗HBc抗体中和作用的结果，

图11是构建质粒p    TB（4）369-4的图解，

图12是构建质粒p    TB（4）369-32及pTB（4）369-41的图解，

图13是构建质粒p    TB（4）441-1的图解。

图14是构建质粒p    TB（4）441-8的图解。

图15是构建质粒p    TB（4）552-8的图解。

图16和17表示大肠杆菌DH1/pTB（4）441-1及大肠杆菌DH1/pTB（4）552-8产物的分子量分析结果。在图16里，使用¹²⁵I-抗HBe抗血清进行的西部斑渍法，以及图17里一种用人的抗HBe抗血清免疫沉淀法。