[其他]集落形成刺激因子的制造方法

说明书

本发明是关于以高收率，高纯度含有集落形成刺激因子（以下简称CSF）的人尿中回收CSF的方法。

CSF是以极微量存在于人尿中的生理活性物质，是作用于骨髓中前驱细胞促进白血球组成细胞处的颗粒球及单球巨噬细胞分裂、增殖的糖蛋白，可期望有治疗白血球降低症的药效。

作为CSF的精制方法有采用吸附剂的方法，阴离子交换体的方法及采用超滤膜的方法等。

在人尿中由于CSF含量极微，使CSF有效地分离、浓缩和精制是困难的。例如以往经常采用的使硅酸盐、硅藻土等矿物与尿接触，吸附CSF，然后使CSF溶出的方法，利用各种阴离子交换色谱来回收的方法。它们的缺点是操作复杂，且因一次所能处理的尿也有限，大量回收微量或分CSF，其成本必然很高。

例如，在采用各种阴离子交换体的色谱法中，柱体法的吸附剂的填充及分批法的利用过滤或离心分离回收吸附等操作都是很复杂的，因而，它们作为大规模有效获取CSF的方法是有缺点的。

再者，尿中有许多杂质，采用以往的方法，这些杂质很容易与CSF一起被回收，这对后续的精制工序是十分不利的。

本发明的目的就是提供一种从含有微量的来自尿的CSF，并且含有许多杂质的溶液中以高收率，高纯度，低成本且操作简单的回收，制造CSF的方法。

本发明的目的是提供一种精制来自人尿中的集落形成刺激因子的方法，其特征是将以纤维素来为基质的片状原料卷成螺旋状结构，制成滤筒，作为阳离子交换体，用这种阴离子交换体来处理含有来自人尿的集落形成刺激因子的溶液。

本发明中所用的含CSF的溶液，并不只限于CSF的水溶液，例如含微量CSF旦有大量杂质的尿液等也可应用。

作为阴离子交换体，如二乙氨乙基-葡聚糖凝胶，季铵乙基（QAE基）-葡聚糖凝胶、二乙氨乙基-纤维素、季铵乙基-纤维素、二乙氨乙基-セファロ-ス，二乙氨乙基-セファセル，スフェロッル-DEA等均可采用，但最好采用含有阴离子交换基的纤维素为基质的片状原料卷成螺旋形，制成滤筒，较为有利。

将通用载体（如纤维素，葡聚糖琼脂糖）用乙烯聚合物交联，再导入季铵乙基，二乙氨乙基（DEAE基），三乙氨乙基（TEAE基），氨乙基（AE基），胍基乙基（GE基）等（离子交换基体参阅图1），将其卷成螺旋状即可制成上述结构的滤筒。其最好形状如图2所示。在图2中，1为离子交换基体（层厚0.1-1mm），2为透水性支持体（层厚0.1-1mm），该支持体最好采用网格状或编织状，其材料可采用如聚苯乙烯、尼龙、聚碳酸酯、聚缩醛、聚四氟乙烯树脂、不锈钢等。

图3是使用该结构的精制方法实施例的一个剖面图，从入口3进入的CSF液体，从外围向中心部4聚集，从出口5排出。箭头所指为CSF液的流动方向，6为放气孔，7为排出口。图4为横截面图，为从外围进入的CSF液体向中心聚集的状态。

作为本发明的使用条件，含CSF的液体最好在pH值为5～7，导电度为20ms/cm（25℃）以下经过圆筒，而使CSF被吸附。在这样的条件下，CSF被吸附，大部分杂质不被吸附而直接通过。然后，用pH为5～7的稀盐溶液〔例如：导电度为20ms/cm（25℃）以下的磷酸缓冲溶液〕洗涤。用这种洗涤操作，可进一步除去杂质，而CSF仍原样吸附而残留下来。

为使吸附的CSF溶出，通入pH为5～9的浓盐溶液〔例如：导电度为30ms/cm（25℃）以上的磷酸缓冲剂，食盐溶液〕就很容易地达到目的。

在本发明中，最好进一步利用起滤膜进行处理。超滤膜的处理，在前述阴离子交换体处理前进行。

作为超滤膜，最好采用能除去较CSF小的低分子物质的超滤膜（即用于分离低分子量者）及能除去比CSF大的高分子物质的超滤膜（即用于分离高分子量者）中的一种，或两种都用。用作分离低分子量者，通常采用1×10⁴～4×10⁴道尔顿的超滤膜。用作分离高分子量者，通常用10⁵～10⁶道尔顿的超滤膜。作为超滤膜，最好采用聚丙烯腈类超滤膜和聚砜类超滤膜及纤维素系超滤膜等。

含有CSF的溶液，通过超滤膜时的条件通常为：

处理液的pH值为5～8

操作压力为1～5kg/cm²

本发明的超滤膜处理法，可用于CSF的回收、制取中的任一工序，但最好先用分离低分子量的超膜滤膜进行处理，然后再用分离高分子量的超滤膜进行处理。