[发明专利]制备能产生用于回收人外周血中白细胞的单克隆抗体的杂交瘤细胞系的方法和利用所述单克隆抗体的回收方法

说明书

本发明是关于一种鼠的单克隆抗体，这种抗体特别适用于检测无红细胞溶解的循环外周血中的白细胞亚型。其次，本发明的目的在于提供一套改进的检测方法，即利用被该单克隆抗体包裹的适宜单分散微球体来回收入血样品中的白细胞。

用对细胞或组织的抗原决定族具有特异性的单克隆抗体包被支持物或微球体，通常将这些支持物或微球体用于检测和诊断。这些都在先有技术中记载了。

为了将所选的细胞群体分类并使之与异源细胞群体分开，磁性粒子或微球体的使用也是众所周知的。Senyei等人的专利4，230，685，Graver的专利3，970，518，4，018，886，和4，115，535，DaVis的专利4，177，253，Molday的专利4，452，773，Gerlinski的专利4，454，234和Rernbaum的专利4，267，234都仅为这种技术的一些例子。Smilh等人的4，272，510和Forrest等人的4，141，687讲授过用磁性粒子达到检测目的的仪器。在挪威，奥斯陆的Sintef根据专利合作条约（PCT）提交的公开国际专利申请中也描述了磁性微球体对细胞分离的应用，其PCT申请号为83/00014，1983年4月22日提交，国际公布号为WO83/03920，1983年11月10日公布及PCT申请号为83/00016，1983年4月27日提交，国际公布号为WO84/02031，1984年5月24日公布。然而，申请人不知道单克隆抗体可成功而精确地用于从人的外周血样中分离白血细胞亚型。

人的循环血是由细胞和液体成分所组成的。细胞成分包括红细胞（红血细胞）、血小板和白细胞（白血细胞）1毫升正常全血样品中含有5×10⁶红细胞，3×10⁵血小板和5×10³白细胞。白血细胞群体又分为5个亚型或群体，称为中性白细胞，嗜曙红细胞，嗜碱细胞，单核白细胞和淋巴细胞。在白血细胞数为5×10³的人血样品中，每毫升血含有3，075个中性白细胞，150个嗜曙红细胞，25个嗜碱细胞，250个单核白细胞和1500个淋巴细胞。淋巴细胞由8种不同的类型组成，表明有几种功能的种类存在。已知大多数控制人体内抗体产生并为抗体的产生作准备的细胞都是在称为淋巴细胞的白细胞群体中发现的。此外，经鉴定淋巴细胞亚型的数目很多。

容易看出对血样中白细胞群体的透彻分析是一个有用的诊断工具。获得这样的资料的常规方法包括自动化电子白血细胞分类仪，机械，电子和光散射细胞计数技术。这种昂贵仪器的使用在经济上受到一定的限制。此外，在无特异的单克隆抗体和特殊技术的情况下，不能用这样的方法来确定白细胞亚型。这也适用于荧光型技术的应用。某些先有技术也需要红血细胞的初溶。

还已知红血细胞（红细胞）缺少多数细胞器，而只有一个单层膜，即原生质膜。几乎所有细胞质成分都能通过渗透溶血作用释放出来，从而提供“血影细胞”，这种血影细胞是相当纯的原生质膜。通过已知的染色技术确定红血细胞膜含有几种富含碳水化合物的蛋白。此外，已确定这些蛋白是细胞表面蛋白。

红细胞含有一种跨膜蛋白，经鉴定是血型糖蛋白A，这个蛋白由16个寡糖和一条单肽组成。大约60%的糖蛋白主体是碳水化合物并且这些碳水化合物单位都位于细胞膜的外表面。由于血型糖蛋白A富含碳水化合物，因而使得它能够很好地着色。蛋白水解的化学修饰和电镜研究表明血型糖蛋白A具有（1）一个含有所有碳水化合物的氨基末端区，该区位于膜的外表面，（2）一个埋藏在烃中心的疏水中区和（3）一个位于细胞内并构成多肽链的羧基末端区。在分子氨基末端部分的碳水化合物单位富含带负电荷的唾液酸基团。

血型糖蛋白B，也叫糖蛋白δ，是与Ss同种抗原结合的糖蛋白。29位上蛋氨酸或苏氨酸的存在表明该同种抗原的区别。看来至今只有血型糖蛋白B的氨基末端部分已序列化了。血型糖蛋白C与称为糖蛋白β和γ的一些成分有关。

构成红细胞血型糖蛋白的糖蛋白链可作为同型和杂二聚体存在，同型和杂二聚体在聚丙烯酰胺电泳（PAGE）之后具有特征带，应该注意可以进一步根据糖基化和唾液酸化的类型及其程度的不同来描述血型糖蛋白。