[发明专利]生产单克隆抗体的方法

说明书

一般地说，本发明涉及在分离和定量检测生物性液体中造血生长因子的免疫学技术中所应用的材料和方法。具体地说，就是包括由新的杂交瘤细胞系(以A.T.C.C.HB-8957，A.T.C.C.HB-8958，A.T.C.C.HB-8959，A.T.C.C.HB-8960，A.T.C.C.HB-8961和A.T.C.C.HB-8962为例)产生的、能与造血生长因子起特异性反应的单克隆抗体，以及应用这些抗体在亲和纯化技术中分离造血生长因子,检测造血生长因子和应用免疫学技术研究这些生长因子。更明确地说，本发明涉及与天然的和重组的人多能粒细胞集落刺激因子(hpG-CSF)特异性反应的单克隆抗体。

人的成血(造血)系统负责各种白细胞(包括中性白细胞，巨噬细胞及嗜碱细胞/肥大细胞)，红细胞和凝血形成细胞(巨核细胞/血小板)的更新。据估计，一般男性成人的造血系统每年产生4.5×10¹¹左右的粒细胞和红细胞，这相当于每年将全部体重更新一次。Dexter等，BioEssays，2，154-158(1985)。

据信，小量祖始“干细胞”向各种血细胞系的分化以及这些血细胞系惊人的增殖和最终分化成为成熟的血细胞都是由少量的特定造血生长因子所负责。因为造血生长因子仅以极微量的形式存在，迄今为止检测与鉴别这些因子所应用的一套方法都仅是根据不同因子对人工培养细胞的不同刺激效应来区分它们。结果，创造出大量的名称来命名实际上数目很少的因子。由此造成的混乱可从下面的例子中窥见一斑：IL-3(白细胞介素3)，BPA(多集落促发活性)，multi-CSF(多集落刺激因子)，HCGF(造血细胞生长因子)，MCGF(肥大细胞生长因子)和PSF(P细胞刺激因子)等，目前认为这些皆适用于一种鼠类造血生长因子的缩写词。Metcalf，Science，229，16-22(1985)。

遗传重组技术的应用已从这种混乱中获得某些条理。例如，刺激产生红细胞的人促红细胞生成素的氨基酸和脱氧核糖核酸的顺序已被获得(见Lin，PCT公布的85/02610号申请书1985年6月20日公布)。重组方法也已被用于分离人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和人巨噬细胞特异性集落刺激因子(CSF-1)的互补脱氧核糖核酸(见Lee等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，82，4360-4364(1985)；Wong等，Science，228，810-814(1985)和Kowasaki等，Science，230，291-296(1985)。

一个称为人多能集落刺激因子(hpCSF)或多能生成素(pluripoietin)的人造血生长因子已被证明存在于命名为5637的人膀胱癌细胞系的培养基中，该细胞系在一些限制性条件下寄存在马里兰州罗克维尔的美国典型培养物收集中心(American TypeCulture Collection)，贮存号为HTB-9。据报告从该细胞系纯化的人多能集落刺激因子在用人骨髓原祖细胞所进行的测定中刺激了多能祖始细胞的增殖和分化，最终导致所有主要类型血细胞的产生。Welte等，Proc.Natl.Acad.Sci(USA)，82，1526-1530(1985)。

初步研究表明在人粒细胞-巨噬细胞集落形成单位试验的头7天期间，被鉴定为人多能集落刺激因子，主要具有粒细胞集落刺激活性。