[其他]猪肺炎霉形体弱毒疫苗的生产

说明书

将强毒猪肺炎霉形体经兔体继代培养成的兔化猪肺炎霉形体弱毒株（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ　ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ　ＬＭｈ）用６８８～８４３代弱毒。可以用兔和鸡胚制成猪肺炎霉形体弱毒冻干苗，用于猪喘气病的预防，注苗后的猪不引起同居感染，不影响增重，免疫力为：６６．６～１００％，平均为７０％，免疫期不低于８个月。

本发明涉及一个新的、用作为预防猪喘气病的猪肺炎霉形体弱毒疫苗的生产和使用。

猪喘气病（又叫猪地方性肺炎，猪霉形体肺炎）是猪的一种慢性传染病。世界广泛流行，给养猪业造成巨大的经济损失。Whittlestone（1973）报导在英国此病使猪的增长率减少20%，每年大约损失为2，000万美元。Ross（1978）报导此病在美国的感染率为20～47%，计每年损失1.2～2.0亿美元;山本（1979）报导在日本此病感染率估计为50%左右，每年经济损失约300亿日元。

在预防此病的疫苗研究方面，至今尚无应用于生产的商品疫苗。美国Lam.K.M.和Switzer.W.P（1971）报导，以猪肺炎霉形体培养物浓缩100倍，裂解后加佐剂制成疫苗，先后作4次免疫，接种猪56头，以强毒攻击后，疫苗组保护率为76.8%，对照组攻毒后发病率83.3%，仅见到一次报导，没有推广;英国Goodwin和Whittlestone（1973）报导试用猪肺炎霉形体作抗原加不同佐剂和不同途径免疫接种猪，未获得预期结果：Goodwine（1973）试制的福尔马林灭能苗，作田间试验，免疫接种猪298头，并用对照猪279头作比较，未见效果;尼日利亚Obegbulem（1975）报导用猪肺炎霉形体的实验性免疫，以皮下和足底途径免疫接种猪11头，以强＊攻击，保护10头，仅一次报导：美国Farrington（1976）以等量花生油或氢氧化铝作佐剂，免疫接种猪36头，花生油佐剂苗获得75%保护率，对照猪89%发病：南斯拉夫Durisic（1975）用浓缩的猪肺炎霉形体的悬浮物，超声波裂解处理与吐温-80及石蜡油制成乳剂，经乳头孔注入乳房内，企图用初乳保护仔猪，未能实用;美国Kishma.M.，和Ross，R.F.（1985）报导用无活性的猪肺炎霉形体和硫酸右旋糖酐免疫接种猪4次，后用有致病性的猪肺炎霉形体经气管攻击，结果没有明显的效力。总之，国外报导猪地方性肺炎疫苗的试验不多，均未达到应用的目的。

我国从40年代末开始零星发生此病，1953年开始大规模流行，后来蔓延全国，国内灭能苗的研究结果，大多数无免疫力，或不能重复。自1959年以来，许多单位都开展了猪气喘病弱毒疫苗的研究。但是，多数未能获得满意的效果。

本发明人以培育安全有效的猪肺炎霉形体弱毒及其生产疫苗的方法为目的，拟用动物传代方法来培育一株弱毒，使之对猪的致病力弱;对猪的免疫力能达到70%左右;该弱毒可以用动物或鸡胚来生产疫苗，并有较宽的制苗代次。

本发明所涉及猪肺炎霉形体弱毒株，是强毒型的猪肺炎霉形体连续在乳免体内继代，适应了在兔体内繁殖，该弱毒对猪致病力弱，一般不会引起猪发生融合性肺炎，也不引起支气管纤毛脱落;可以用兔和鸡胚来制苗;注苗后的猪不引起同圈未接种猪的同居感染;该弱毒对猪的免疫率达66.6～100%，平均为70%;对猪的免疫期不低于8个月;该弱毒700-840代的传代毒均可以用于制苗;在低温下有适当的保存期，该弱毒被命名为兔化猪肺炎霉形体弱毒株_mycoplasma hyopneumoniae LMH（Lapinized Mycoplasma hyopneumoniae），以下简称LMh，1986年12月11日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，CGMCC0121。

用本发明人培育的兔化猪肺炎霉形体弱毒LMh制造猪肺炎霉形体弱毒疫苗可以有兔体法和鸡胚法两种制苗方法，所制出的疫苗效果相同。

兔体法制苗：

以LMh冻干毒，经乳兔复壮1～2代的1∶10～1∶20的乳兔肺乳剂作为种子液，以其2毫升接种于健康大兔的胸腔内，于接种后的第4天采集兔肺，并以5%蔗糖脱脂乳制成1∶5的兔肺乳剂，分装后冻干封口、保存。

鸡胚法制苗：