[其他]改良酵母菌株

权利要求书

1、一种增加酵母的二氧化碳和乙醇产生之速率的方法，所说的方法包括降低细胞内ATP水平，从而刺激酵解。

2、根据权利要求1的方法，其中包括在酵母基因型中以一可调节的启动子置换编码代谢酶之基因的天然启动子，以允许可调节地表达所说的酶，进而允许由所说的酶催化的代谢在逆反应的同时进行，以消耗ATP。

3、根据权利要求2的方法，其进一步包括对编码代谢酶的基因进行遗传修变，以阻止或消除对所说的酶的变构或其它形式的抑制或失活化作用。

4、根据权利要求2的方法，其中所说的酶是果糖-1，6-二磷酸酶（FDP酶）。

5、根据权利要求4的方法，其中包括使编码FDP酶的基因被诱变，以使被诱变基因的密码子12编码丝氨酸以外的某种氨基酸。

6、根据权利要求5的方法，其中使编码FDP酶的基因进一步被诱变，以使果糖-2，6-二磷酸对酶的变构抑制作用降低。

7、根据权利要求5的方法，其中编码FDP酶的基因被进一步诱变，以使腺苷一磷酸对酶的变构抑制作用降低。

8、根据权利要求2的方法，其中编码酶的基因在酵母生长的增殖期内不被表达。

9、根据权利要求2的方法，其中可调节的启动子是温度敏感性启动子，以致使编码酶的基因只能在预定的温度下被表达。

10、根据权利要求2的方法，其中表达是在由FLP蛋白催化的被调节之遗传重组的控制下进行的。

11、根据权利要求2的方法，其中通过对细胞外酸性磷酸酶（AP酶）基因的遗传修变以使AP酶保留于酵母胞浆内，从而使细胞ATP水平降低。

12、根据权利要求11的方法，其中遗传修变包括将含有编码成熟AP酶的、没有功能性分泌前导序列之基因的载体引入酵母细胞内。

13、根据权利要求12的方法，其中载体包含一自发复制的单拷贝、含着丝粒的质粒。

14、根据权利要求12的方法，其中载体包含一含有酵母2μ复制原点的多拷贝质粒。

15、根据权利要求12的方法，其中载体被插入到酵母的基因组内。

16、根据权利要求1的方法，其中向酵母基因型内引入一编码代谢酶的、于启动子的表达控制下的基因，以允许基因的组成表达，从而允许由所说的酶催化的代谢反应与逆反应同时进行，以消耗ATP。

17、根据权利要求16的方法，其中表达是进一步处于由FLP蛋白催化的被调节之遗传重组控制下的。

18、根据权利要求1的方法，其中包括用能够直接或间接诱导ATP酶的化学物质处理酵母细胞以降低ATP水平。

19、一株经过改良的酵母，其中改良包括经遗传修变降低细胞内的ATP水平，从而刺激酵解並提供一株具有高发酵活性的酵母。

20、根据权利要求19的酵母，其中的修变包括向酵母内引入包含一缺失功能性分泌前导序列之AP酶基因的载体DNA，从而使AP酶在其中被表达但並不由细胞内分泌出来。

21、根据权利要求19的酵母，其中的修变包括向酵母内引入包含编码代谢酶的、处于一可调节启动子的表达控制下之基因的载体DNA，以允许所说的酶得以被调节的表达，进而允许由所说的酶催化的代谢反应在逆反应的同时进行，以消耗ATP。

22、根据权利要求19的酵母，其中的修变包括向酵母内引入包含编码代谢酶的、处于启动子的表达控制下之基因的载体DNA，以允许所说的酶的组成表达，进而允许代谢反应在逆反应的同时进行，以消耗ATP。

23、根据权利要求22的酵母，其中表达进一步处于由FLP蛋白催化的被调节之遗传重组的控制下。