[其他]相应于轮状病毒的主要中和蛋白质的抗原和免疫决定子的肽

说明书

本发明涉及轮状病毒的主要外壳中和糖蛋白（病毒蛋白7或VP₇），内或壳包核酸蛋白（病毒蛋白6或VP₆）及外壳蛋白（病毒蛋白3或VP₃）肽片断，及用它们作鸟类和包括人在内的动物体内的疫苗。本发明进一步涉及有关轮状病毒肽片断的制备，涉及将肽粘附在载体上，涉及将它们用作疫苗。VP₃肽的另一特点是它能与轮状病毒竞争胰蛋白酶，因而阻碍病毒传染。所以，VP₃肽也可有治疗用途。

附图简述

图1表示轮状病毒VP₇糖蛋白的氨基酸顺序，14K多肽列于框内。

图2表示SA-11基因6克隆复制体的核苷酸序列。示出了（+）向股（对应于mRNA）。示出了蛋白产物的予计的氨基酸顺序，终端部位下划了线。

图3示出轮状病毒VP₃蛋白的氨基酸顺序。C486（牛的）VP₃氨基酸顺序在我们的实验室中得到。SA-11（猴的）VP₃氨基酸顺序来自现有技术。

图4示出牛轮状病毒（BRV）14K肽片断的分离。泳道A和B分别图解说明用65μg木瓜蛋白酶/cm凝胶和130μg木瓜蛋白酶/cm凝胶制成的BRV糖蛋白的降解模式。泳道C图解说明提纯的14K肽片断。泳道表示杂交瘤11D12-6与单克隆抗体的免疫斑-ELISA反应。泳道D图解说明在银染色的聚丙烯酰胺凝胶中的提纯的14K肽片断。

图5示出在免疫进程中三个不同时间14K多肽各种制剂的抗体效价。上面部分示出使用双壳轮状病毒作为抗原由ELISA测定的总抗体效价。下面部分示出用噬斑减数检测法测定的中和抗体的效价。A组，14K未结合的多肽;B组，14K BSA-结合的多肽;C组，提纯的VP₇;D组，传染性的牛轮状病毒（BRV）;E₁组，受传染性BRV61天的动物;E₂组，施用佐剂的动物。免疫作用记录在表2中更详细地叙述。

图6示出老鼠血清与C486牛轮状病毒（BRV）蛋白的免疫斑ELISA反应。泳道P，予抽血的;泳道A，施用14K未结合的多肽的组;泳道B，14K结合的多肽;泳道C，施用BRV VP₇（38.2K糖蛋白）的组;泳道D，施用传染性病毒的组;泳道E和E₂分别施用盐水和弗罗因德氏（Freund）完全佐剂的组。各组的免疫进程在表2中更详细地叙述。

图7示出为确定14K的位置用金黄色酿脓葡萄球菌V₈蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和溴化氰对VP₇进行解离的模式。

图8示出合成肽VP₇阻止病毒粘附在细胞上的能力。

图9示出合成肽的ELISA抗体效价。

图10示出在老鼠体内由合成肽VP₇诱导的经病毒中和的抗体效价。

图11示出由单克隆1D₇（泳道B）;1B₄（泳道C）;1B₉（泳道D）和1D₁₀（泳道E）免疫沉淀〔³⁵S〕蛋氨酸示踪牛轮状病毒感染的细胞的溶胞产物。泳道A，是与由超免疫产生的兔抗牛轮状病毒抗体的反应。分子量标志的位置在左边。

图12示出单克隆抗体和单特异性多克隆抗血清与转移到硝化纤维素薄膜上的牛轮状病毒多肽的反应。泳道A，单克隆抗体1D₇;泳道B，1B₄;泳道C，1B₉;泳道D，1D₁₀和泳道E，抗壳包核酸单特异性抗血清。反应蛋白的分子量给在左边。

图13示出牛、猴、猪和人轮状病毒VP₆壳包核酸蛋白与单克隆抗体1B₄的免疫斑ELISA反应。泳道A，从牛分离出的C486;泳道B，从猪分离出的OSU;泳道C，从牛分离出的NCDV;泳道D，从人分离出的Wa;泳道E，从牛分离出的UK;泳道F，从人分离出的ST₄;泳道G，从猴分离出的SA-11。从人分离出的Wa和ST4属亚群2，而所有其它分离物属亚群1。分子量在右边指明，腹水对照也标明。