[其他]细菌内毒素测定仪

说明书

本实用新型是一种细菌内毒素测定仪，属于医药卫生用分析仪技术领域。该仪器广泛使用于生物体液，注射用药品，食品饮料，或其它物品中细菌内毒素含量的测定。

细菌内毒素检查，简称BET，正式文首见于美国国家药典（US廿版）P888～889页，该方法是用鲎变形细胞溶解物（LAL，又称鲎试剂）做为检测试剂，根据极微量的内毒素便能与LAL试剂显示出蛋白凝固反应（生成乳白色凝胶）的原理，来进行检测，具体方法是：在试管中加入一定量的鲎试剂和等体积的供试品缓缓摇至均匀，置于恒温水浴中，在37±1℃上保温60±2分钟后，小心拿出观察结果，如形成凝胶且反转180°仍保持完整，则结果为阳性（＋），否则为阴性（－）。这种凝胶极易受到不可逆的破坏，当要形成凝胶时稍有振动，就可出现不可逆破坏，这样就出现了假阴性结果。由于整个生化反应过程无法直接观察，往往需要多次预试，测试精度和重演性均受到很大影响，测试误差很大。

本发明的目的是为了提供一种使用方便，能够直接观察生化反应全过程的细菌内毒素测定仪，并可根据观察到的反应时间计算细菌内毒素的含量。

本实用新型所述的细菌内毒素测定仪是由两部分组成：一部分是温度自控系统，一部分是观察系统。温度自控系统是这样实现的：将温度调节器〔8〕置于适当的位置，控制电加热管〔11〕工作，使得水浴温度为37±0.5℃，精确温度可以从浸于水浴中的温度计〔10〕和表式温度计〔9〕读出；观察系统是这样实现的：将试管〔2〕放在试管架〔3〕上，置于水浴中，在试管〔2〕前方的水浴中设置一玻璃管〔4〕，玻璃管〔4〕内壁涂上或贴上带有一条狭缝的反光膜〔5〕，将灯管〔6〕放入玻璃管〔4〕内，使其发出的光线经反射膜〔5〕反射后，通过狭缝照射在试管〔2〕底端的反应物上，试管〔2〕后方设置一深色背景〔1〕（颜色可以是蓝色，可以是黑色，也可以是棕色），仪器的前壁设有一个透明观察窗〔7〕（其材质可以是玻璃，也可以是透明高分子材料），检测人员可以通过透明观察窗〔7〕在深色背景〔1〕的衬托下清晰地直接观察到生化反应的全过程，反应终点时，反应液由无色透明液体变为乳白色混浊，记录反应时间，根据反应时间计算出细菌内毒素的含量。（结构如图）

经研究发现，供试品细菌内毒素的含量Ci与鲎试剂形成凝胶所需时间Ti成幂函数关系：

Ci＝aTi^b……（1）

（1）式中参数a、b对于同一批鲎试剂来说为一常数，可以用标准曲线法求出。

标准曲线：用不含内毒素的蒸馏水将鲎试剂溶介，混匀，精密分取0.1mL澄明液于各试管中，再加入各浓度等级（Ci）的标准内毒素稀释液0.1mL，轻轻旋摇均匀，放入细菌内毒素测定仪中进行测定，与标准浊度管（用高分子材料制成，浊度、色度酷似刚形成的鲎试剂一细菌内毒素凝胶，可永久保存）比较，判断反应终点，观察并记录各试管形成凝胶的时间Ti。

厦门鲎试剂厂841012－C批号鲎试剂测得的数据如下：

Ci        10        5        2.5        1.25        0.625

Ti        54        73.67        93.5        113.1        151.68

1        0.699        0.398        0.097        －0.204

1.732        1.867        1.971        2.054        2.181

根据上述数据绘制Ci－Ti，LgCi——LgTi        曲线。

将（1）式两边取对数得：

LgCi＝Lga＋bLgTi        ……（2）

（2）式为一线性方程，用选点法，平均值法、最小二乘法或电子计算机均可得出方程式的两个参数a、b及相关系数γ。

用最小二乘法计算的结果为：

a＝65200        b＝－2.762        γ＝－0.99704

由此得出厦门鲎试剂厂841012－C批号的鲎试剂经验公式为：

Ci＝652000Ti^－2.762……（3）

根据（3）式就可以测试各供试品细菌内毒素的含量。

利用该仪器进行细菌内毒素的检测，比原方法简单，方便。能直接观察到反应时间并计算出细菌内毒素的含量。该仪器结构设计合理，制备工艺简单，造价低廉，便于推广应用。