[其他]植物病毒或其作用的改变

说明书

本发明涉及植物病毒或其作用的改变。

有些黄瓜花叶病毒培养物的颗粒除了含有三种单链RNA基因组和一种对黄瓜花叶病毒颗粒蛋白起mRNA作用的亚基因组外，还含有另一种一般长约335核苷酸的单链直线RNA分子。这种附加的分子已知为随体RNA，并不与黄瓜花叶病毒RNA基因组共用相当大的核苷酸顺序，但是只在由黄瓜花叶病毒感染的植物体内或原生质体内复制。不含有随体RNA的黄瓜花叶病毒隔离群在无随体情况下，可以在植物体内重复培养，但在把随体RNA加到这种培养物时，它就被合成，并成为病毒隔离群的组成而继续存在。随体RNA对黄瓜花叶病毒感染的作用随菌株不同而各有差异。在许多情况下，黄瓜花叶病的正常症状消除了，结果是受感染的植物显示出没有明显感染的痕迹。因此，其他种的随体的存在导致与黄瓜花叶病毒有明显区别的严重症状的产生。

由于含有用某些随体RNA株的黄瓜花叶病毒感染的植物所表现的症状较之无随体感染的要轻，因此建议使用含有随体RNA的完全病毒以保护植物抵御黄瓜花叶病毒感染的作用。事实上，实验表明：用带有随体的黄瓜花叶病毒株进行预感染可以防止黄瓜花叶病并导致胡椒产量的增加。实验还证明，用含有良好的随体RNA黄瓜花叶病毒株感染的蓄茄对带有病毒随体RNA的黄瓜花叶病毒株的影响具有交叉保护作用。用完全病毒作为预防剂也会产生严重的问题。保护株本身对生长和产量也可以有不利影响，或者成为其他种植物的一种感染储藏。无毒株突变为有毒株也是可能的。

我们试图采用本发明所提供的方法来消除这些困难，本发明通过由核基因组的转录，让生物活性物质，较理想的是由病毒衍生的遗传物质，特别是随体RNA，保持在植物体内。

本发明提供一种改变植物病毒或其作用的方法包括将遗传物质引入植物体内并用植物病毒感染该植物借以引入遗传物质的表达改变植物病毒或其作用。

较为可取的是通过任意的改变，从植物病毒中产生有待引入的遗传物质，该植物病毒可以是与感染植物的植物病毒相同，也可以不相同。

在较佳实施例中，已引入遗传物质的植物体的表达使由植物病毒侵染的植物的症状得到减轻。

转移到植物体内的遗传物质最好是相当于植物病毒随体RNA的cDNA，cDNA和/或随体RNA都可进行任意改变。

病毒RNA的表达可以使植物免受相应的病毒RNA的致病作用。换言之，病毒源的RNA的表达可以防止不具有顺序同源的病毒RNA的致病作用。还应该注意的是作为RNA的病毒遗传物质可以独自发挥其将该RNA转译到蛋白质的作用。

本发明还提供了一种植物遗传工程的方法，包括掺入植物DNA核基因组，该植物DNA可以在植物体内表达，并且能够由植物病毒来解决植物难题，能够解决所述植物病毒或其作用的改变问题。本发明进一步涉及用这种方法解决植物及其后代的遗传工程问题。

病毒尤其是适用于本发明那些分子量相当低的，一般少于100个核苷酸的随体RNA。例如有黄瓜花叶病毒或其他黄瓜病毒，烟草环斑病毒或其他nepo病毒，番茄丛矮病毒或其他番茄病毒，芜菁叶丛生病毒和sobemo病毒或与他们有关的病毒。能够用这些病毒感染的任何植物都可以用于本发明。

较佳的病毒是黄瓜花叶病毒，而用于转化的遗传物质是对应于黄瓜花叶病毒随体RNA的cDNA。cDNA最好是转移到能将DNA转移到受体植物核基因组内的表达载体，例如以根癌土壤杆菌（Agrobacterium    tumefaciens）Ti质粒系统为基础的表达载体。

因此本发明还提供一种能够把DNA转移到受体植物核基因组内的表达载体，其特征在于其把可以表达的能够转移的DNA掺入受体植物，并且由植物病毒来解决植物难题，能够解决该植物病毒或其作用的改变问题。表达载体最好是一种包括由根癌土壤杆菌的Ti质粒、转录启动子、、对应于黄瓜花叶病毒随体RNA的cDNA和转录终止区组成的T-DNA边缘顺序的质粒。

受保护的植物细胞如叶片受到积聚在表达载体的根癌土壤杆菌株感染，并且全部植株从被转移的感染细胞重新生出。

在若干实验室里已经证明，根癌土壤杆菌的Ti质粒可以用于把新的DNA顺序引入植物的核DNA。此外还证明，如果这些DNA顺序含有适当的启动子顺序和终止区顺序，则DNA就可转录到转化细胞的RNA中，能够引入新的并且与根癌土壤杆菌无关的DNA顺序的其他任何方法和载体也都适用于本发明，只要将转录启动子和转录终止区掺入作为适宜病毒顺序表达带的载体分子中。采用转化植物细胞的DNA直接吸收方法也是可能的，关于这个方法可参阅下列论文：