[其他]一种用牛、马血清制备放免及生化质控物的方法

说明书

本发明属于生物制品（诊断试剂）的制备方法。所得产品可以作为放射免疫（RIA）和生物化学检测的质控物，是用于监控放免和生化测定准确性所必备的试剂。

目前世界上普遍采用的质控物制备方法，是选择乙肝病毒表面抗原阴性（HBsAg（-））的正常人或病人血清，经简单处理后，进行调配制得。

例如：

中华人民共和国卫生部药品和生物制品检定所（1981）曾用正常人混合血清加10%糖用活性碳搅拌6-8小时，4℃吸附24小时，4000rpm低温离心，取上清液经2kg/cm²氮气加压过滤除菌，得到低T₃、T₄纯品，分装，冻干，制成T₃、T₄放免质控物。

上海市计划生育研究所（1983）制备生殖激素放免质控物，是收集含某种激素较高或较低的人血清，互相调配制成。

近年出现在“剔除”某物质的血清中，加入被测标准物的方法。如英国爱丁堡实验室（1982）采用在人血清中加入少量标记LH和FSH，与过量偶联有豚抗LH和豚抗FSHIgG的琼脂凝胶处理，混合后，过夜。滤取血清，加入过量偶联有羊抗豚IgG琼脂凝胶处理，以去除血清中含有的少量豚抗LH和FSHIgG。此法仍不能完全除去LH和FSH，其血清中含标记的LH和FSH仍有原量的10%。

生物化学检验质控物，近年有报导用动物血清取代人血清作原料者，但是均未采用亲和层析法和离子交换层析法处理血清。

上述方法由于大多采用人血清作原料，大量采集不易，血清均质性差，乙型肝炎表面抗原阳性率高，大批量生产和长期保存困难，成本较高。而且，上述处理方法也不可能特异去除某种待测物或干扰物，因而得不到真正不含某种待测组分的“零”血清，故质控物的质量不高、稳定性差;且处理方法的工艺繁复，所用材料多只能一次性使用。

本发明的目的是：在提高质量，降低成本，保证使用安全的前题下，寻求一种质控物基质材料生产的新材料、新方法。

本发明的要点是：以马血清或牛血清为原料，过滤除菌后，经各种特定的亲和层析或离子交换层析处理，制成不含某种待测物或干扰物的“零”血清，再加入一定量的某种激素、生物活性物质、酶或电解质纯品，配制成包括零、低、中、高浓度该物质的放射免疫或生化质控物。

本发明的优点是：原料来源丰富，成本低，使用安全。制备方法先进，产品质量稳定可靠。

实施例：

一、制取去激素和去生物活性物质血清的工艺流程如下（以去生长激素（hGH）血清的制备为例，参见工艺流程图1、2）。

1、抗hGHIgG的提纯：将抗hGH血清10ml用等体积Tris/Hcl（0.2M.PH8.6含2M/L Nacl）缓冲液稀释，加于SPA-琼脂糖凝胶（SPA-Sepharose 4B）层析柱（1×10cm）分离纯化。用0.1M的相同缓冲液淋洗至无蛋白流出后，用0.05MHAc/Hcl（PH3.0）缓冲液洗脱，收集洗脱液的蛋白峰，立即加入等体积的0.1MH₃PO₄（PH9.0）中和至PH8.6，此即为有活性的特异性IgG（回收率可达80%）。

2、抗hGHIgG-琼脂糖凝胶亲和层析柱的制备：

①用已有技术Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（参见附录1）活化琼脂糖凝胶，在各自适宜的反应条件下与含抗IgG的反应液（5～10mgIgG/ml）按10～30mgIgG/lgm湿胶的比例偶联，制成亲和层析柱。收集偶联前、后液在280nm处作紫外分光测定，按下式计算偶联率和偶联容量：

IgG（gm）＝OD280nm÷1.3×V（ml）

或直接在紫外光检测标准曲线上查得IgG的值（gm）。

偶联容量＝〔偶联前IgG（gm）-偶联后IgG（gm）〕/湿胶（gm）

偶联率＝ (〔偶联前IgG（gm）-偶联后（IgG（gm）〕)/(偶联前IgG（gm）) ×100%

②用此胶装柱（1×10cm），经0.1MTris/HAc（PH7.7）缓冲液淋洗平衡后，用加有微量示踪物的hGH马或牛血清溶液（1ug/ml）10ml（一般不大于柱床体积）过柱层析。同步监测其蛋白峰值、淋洗平衡液和洗脱液的放射性总计数，按下式计算亲和容量：

亲和容量＝ (洗脱峰总CPM)/(（蛋白峰+淋洗液+洗脱峰+洗脱液）总CPM)

×hGH总量＝可去除hGH量/一次层析

一支偶联率为20%（1×10cm）柱，一次可处理血清200ml。

3、去hGH血清的制备：